icaA-D基因?qū)RSA分離株生物膜形成能力及耐藥性影響的研究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：S852.6單位代碼：10364密級(jí)：學(xué)號(hào)：12720249安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文icaAD基因?qū)驅(qū)RSA分離株生物膜形成能力分離株生物膜形成能力及耐藥性影響的研究及耐藥性影響的研究StudyontheEffectoficaADGenesontheCapacitytoFmBiofilmAntibioticResistancesinMRSAIsolate研究生：張婷婷指導(dǎo)教師：李槿年教授合作指導(dǎo)教師：申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類(lèi)級(jí)

2、別：農(nóng)學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)所在學(xué)院：動(dòng)物科技學(xué)院答辯委員會(huì)主席：二O一五年五月摘要耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MethicillinresistantStaphylococcusaureus，MRSA）是一種重要的人獸共患病原菌，可引起人和動(dòng)物的皮膚與軟組織化膿性炎癥、心內(nèi)膜炎、肺炎等多種疾病。由于MRSA極易形成生物膜、具有多重耐藥性和免疫逃避性，使其感染易于慢性化且難以徹底治愈，給畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展

3、和公共衛(wèi)生安全帶來(lái)威脅。胞間多糖黏附素(PolysacideImercellularAdhesin，PIA)在葡萄球菌生物膜形成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。PIA由ica操縱子控制合成，該操縱子包含1個(gè)阻遏基因icaR和4個(gè)功能基因（icaA、icaD、icaB、icaC）。已有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)icaA和icaD基因共表達(dá)時(shí)，可大大提高N乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶活性，進(jìn)而促進(jìn)PIA合成，但icaAD基因在MRSA生物膜形成中的作用仍需確證。本研究在檢測(cè)41

4、株MRSA分離株的耐藥性、生物膜形成能力及其相關(guān)性的基礎(chǔ)上，利用基因同源重組技術(shù)構(gòu)建MRSA安徽分離株icaAD基因缺失株，通過(guò)比較分析野生株和缺失株的耐藥性和生物膜形成能力，明確icaAD基因在MRSA生物膜形成和耐藥性產(chǎn)生中的作用，從而為尋找藥物作用靶點(diǎn)，研發(fā)有效治療藥物奠定基礎(chǔ)。本研究?jī)?nèi)容和結(jié)果主要包括以下幾個(gè)方面：1MRSA分離株的耐藥性檢測(cè)采用KB紙片擴(kuò)散法和微量肉湯稀釋法測(cè)定41株受試MRSA分離株對(duì)14種抗菌藥物的耐藥性及

5、其最小抑菌濃度（MinimalInhibityConcentration，MIC），同時(shí)采用PCR方法檢測(cè)受試MRSA分離株攜帶耐藥基因的情況。結(jié)果顯示，除替考拉寧和萬(wàn)古霉素外，受試MRSA分離株對(duì)青霉素、苯唑西林、頭孢他啶、克林霉素、阿奇霉素、環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、頭孢噻肟、慶大霉素、丁胺卡那和氯霉素均呈現(xiàn)耐藥，耐藥率和MIC值分別為100%（MIC≥0.25）、100%（MIC≥4）、80.5%（MIC≥32）、78.1%（M

6、IC≥4）、63.4%（MIC≥8）、63.4%（MIC≥4）、48.8%（MIC≥16）、46.3%（MIC≥16）、41.5%（MIC≥64）、41.5%（MIC≥16）、39.0%（MIC≥64）和12.2%（MIC≥32）。97.6%（4041）受試MRSA分離株表現(xiàn)為多重耐藥(≥3種)，其中3耐、4耐、5耐、6耐、7耐、8耐和9耐的分離株數(shù)分別為2、4、11、13、7、3和1；受試MRSA分離株至少攜帶1種所檢測(cè)的耐藥基因，其