發(fā)酵食品中乳酸菌分離鑒定及生物被膜介導(dǎo)其耐藥性的研究.pdf

1、目的：以發(fā)酵食品中分離、鑒定的乳酸菌為研究對(duì)象，檢測(cè)乳酸菌對(duì)幾種常見(jiàn)抗生素藥物敏感性情況，探討其表現(xiàn)型耐藥、基因型耐藥及其生物成膜形成關(guān)系，分析乳酸菌耐藥的機(jī)理及其涉及的食品安全問(wèn)題。
　　 方法：采用生理生化及16SrDNA序列測(cè)序分析對(duì)分離菌株進(jìn)行種屬鑒定。采用紙片法和平板稀釋法進(jìn)行定性和定量分析乳酸菌對(duì)氨芐青霉素(AM)、萬(wàn)古霉素(V)、鏈霉素(S)、紅霉素(T)和四環(huán)素(TE)五種抗生素藥物敏感性。并采用PCR檢測(cè)技術(shù)分

2、析菌株可能攜帶的抗生素耐藥基因。利用微孔板結(jié)晶紫染色法檢測(cè)乳酸菌生物成膜能力，并檢測(cè)生物被膜形成菌對(duì)藥物的敏感性(BIC)，運(yùn)用SPSS13.0軟件獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)方法探討其抗生素耐藥與乳酸菌生物成膜能力之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：在來(lái)自傳統(tǒng)的發(fā)酵食品中分離篩選出53株乳酸菌，并鑒定其種屬為：乳酸乳球菌12株，干酪乳桿菌21株，鼠李糖乳桿菌10株，保加利亞乳桿菌1株，嗜熱鏈球菌9株。藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，所有菌株對(duì)鏈霉素耐藥，37株對(duì)萬(wàn)

3、古霉素耐藥，7株對(duì)四環(huán)素和紅霉素耐藥，6株對(duì)氨芐青霉素耐藥。不同種屬的乳酸菌對(duì)5種抗生素表現(xiàn)為不同程度耐藥，并且有些菌株表現(xiàn)為對(duì)幾種抗生素耐藥。并未檢測(cè)到相應(yīng)抗生素的耐藥基因。在生物被膜的形成能力檢測(cè)中，其中32株乳酸菌具有不同的生物成膜能力。14株表現(xiàn)為弱成膜能力，8株表現(xiàn)為中強(qiáng)成膜能力，10株表現(xiàn)為強(qiáng)成膜能力。所有的菌株對(duì)鏈霉素和萬(wàn)古霉素表現(xiàn)高水平耐藥，MIC范圍為0.256-4.096mg/ml。而大多數(shù)菌株對(duì)氨芐青霉素敏感，其M

4、IC范圍為0.004-0.016mg/ml。所有菌株對(duì)所有抗生素的BIC均大于MIC。19株(59.3％，19/32)菌株對(duì)氨芐青霉素的BIC比MIC大256-1024倍；18株(56.3％)對(duì)紅霉素的BIC比MIC大128-512倍，17株(53.1％)對(duì)四環(huán)素的BIC比MIC大256-512倍；20株(62.5％)對(duì)萬(wàn)古霉素的BIC比MIC大2-4倍；19株(59.4％)對(duì)鏈霉素的BIC比MIC大7.8-15.6倍。這表明乳酸菌成膜