豬源乳酸菌分離鑒定及初步應(yīng)用.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityDissertationSubmiRedinpartialfulfillmentoftherequirementforMasterdegreeIdentificationandPreliminaryApplicationofLactobacillusfromtheFecesofPigletsByNaWreiDirectedbyProfYanXiongChengdu，611130，

2、Sichuan，ChinaJune，2016摘要本研究從雅安規(guī)?；i場(chǎng)10日齡內(nèi)健康仔豬糞便中分離并篩選出耐酸、耐膽鹽、耐胰酶且產(chǎn)酸能力強(qiáng)的優(yōu)良乳酸菌菌株，闡明了乳酸菌的抑菌機(jī)理和抑菌條件，成功研制出了適合生產(chǎn)上用于預(yù)防和治療哺乳仔豬細(xì)菌性腹瀉、改善仔豬斷乳應(yīng)激反應(yīng)、促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)和降低料肉比的優(yōu)良乳酸菌制劑。對(duì)分離得到的13株乳酸菌進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌學(xué)和16SrRNA方法進(jìn)行鑒定，確定YW1、4、6、8和10株為唾液乳桿菌唾液亞種，YW二2、

3、3、5、7、9、11和12株為唾液乳桿菌水楊素亞種，H109株為嗜酸乳桿菌。通過(guò)低酸性環(huán)境、高膽鹽濃度和高胰蛋白酶條件下的生長(zhǎng)存活試驗(yàn)及產(chǎn)酸能力鑒定試驗(yàn)，最終篩選出能在pH20酸性環(huán)境、O3％膽鹽和14％胰蛋白酶中存活，且產(chǎn)酸能力強(qiáng)的Yw二7、YW二1和H1093株菌作為后續(xù)試驗(yàn)用菌株。乳酸菌與大腸桿菌混合培養(yǎng)體外抑菌試驗(yàn)證實(shí)，乳酸菌的抑菌作用具有種屬、活菌濃度和pH值依賴性，其中，Yw一7培養(yǎng)液的pH值降低速率最快，最低pH值可達(dá)32

4、9，抑菌能力最強(qiáng)，YW1次之，H109最差。YW二7與大腸桿菌的菌液體積比為l：1、2：1和4：1混合培養(yǎng)時(shí)，分別在12h、8h和4h時(shí)呈現(xiàn)完全抑制大腸桿菌生長(zhǎng)的作用。在牛津杯法抑菌試驗(yàn)中，Yw7發(fā)酵上清液對(duì)大腸桿菌的抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈直徑可達(dá)1308～2014mm，而YW1和H109的抑菌作用較差，僅為1232～1824mm和112釓1732mifl。此外，相同pH值的HCl對(duì)大腸桿菌無(wú)抑制作用，抑菌圈均為0：當(dāng)HCl的pH值調(diào)至3

5、00時(shí)，對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑也僅為956mill，抑菌效果遠(yuǎn)低于乳酸菌發(fā)酵上清液。這一結(jié)果表明，酸性環(huán)境有助于乳酸菌發(fā)揮其抑菌作用，但并非抑菌的唯一因素。氣相色譜檢測(cè)菌株產(chǎn)生有機(jī)酸的試驗(yàn)結(jié)果顯示，分離的乳酸菌菌株能產(chǎn)生乳酸、苯乳酸、硬脂酸、脯氨酸、丙氨酸、乙酸、亮氨酸、甘氨酸、棕櫚酸和維生素C，在產(chǎn)乳酸和苯乳酸性能上，YW7YWoIH109。研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)24h內(nèi)，乳酸菌培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，培養(yǎng)液中乳酸和苯乳酸的含量越高。Yw7培養(yǎng)至24h