大黃魚腸道乳酸菌的分離與鑒定.pdf

1、我們利用T-RFLP方法分析了大黃魚腸道不同部位中可培養(yǎng)異養(yǎng)細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，大黃魚腸道中可培養(yǎng)異養(yǎng)細(xì)菌的優(yōu)勢菌群的16SrRNA基因大小在494bp處，屬于不動桿菌屬（Acinetobacter sp.）；前腸微生物的多樣性明顯的少于盲囊、后腸及糞便三個部位的多樣性。
　　乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一類革蘭氏陽性菌，通常不運動，不形成孢子，乳酸為其唯一的或是主要的發(fā)酵代謝產(chǎn)物。乳酸菌廣泛

2、分布在自然界，而且在工業(yè)、農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥等與人類密切相關(guān)的重要領(lǐng)域的實際應(yīng)用價值越來越高。
　　本研究用MRS培養(yǎng)基從大黃魚腸道分離出15株觸酶陰性，革蘭氏陽性的菌株。通過形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特性測定、16S rRNA基因序列分析、藥物敏感檢測對其進(jìn)行分類鑒定，確定其中8株菌為格氏乳球菌，其余為葡萄球菌和地衣芽孢桿菌。這是從正常魚體內(nèi)分離到不具致病性的格氏乳球菌的首次報道。8株格氏乳球菌的生理生化特性相似：最適生長溫度為37℃，當(dāng)培養(yǎng)

3、溫度上升到50℃時，菌株不生長；最適 pH為6.8左右；最適鹽度為2％，在含鹽量為6.5%的培養(yǎng)基上不生長；不能利用乳糖，能夠利用其他糖類像阿拉伯糖、纖維素二糖、麥芽糖、松三糖、鼠李糖、葡萄糖等；溶血性試驗結(jié)果表明8株格氏乳球菌均為α溶血；藥物敏感試驗顯示該菌株對氨芐青霉素、紅霉素、阿奇霉素和阿莫西林高敏；對頭孢拉定、萬古霉素、環(huán)丙沙星、氯霉素、噻孢霉素、氧氟沙星敏感；對卡那霉素、頭孢呋辛、替硝唑和鏈霉素耐受。
　　研究不同因子對

4、試驗菌株生長的影響，我們發(fā)現(xiàn)菌株對膽鹽有一定的耐受性，在膽鹽濃度為0.4%時，菌株依然可以成活，但成活率明顯降低；在耐酸性試驗中，菌株在pH3的培養(yǎng)基中成活率達(dá)16.18%以上；在2%濃度的胰蛋白酶中，各菌株的成活率在13.80%以上；鹽度耐受試驗中，菌株可以在0%-6%鹽濃度的培養(yǎng)基上生長，生長率在50%以上，當(dāng)鹽度為2%時，生長率最高達(dá)99.34%；不同溫度對菌株的成活率影響試驗中，菌株在15-45℃的培養(yǎng)條件下成活率在達(dá)20.78

5、%以上。
　　我們對格氏乳球菌的致病性進(jìn)行了研究，用0.1mL菌液（1.0×107CFU/mL）人工感染小鼠(30d)、鱸魚和大黃魚(15d)。結(jié)果小鼠、鱸魚和大黃魚都未死亡，也沒有出現(xiàn)感染該致病型菌的癥狀，但是16sPCR結(jié)果表明，小鼠、鱸魚和大黃魚菌被格氏乳球菌感染。其次，我們利用特異性引物L(fēng)g來驗證格氏乳球菌是否具有莢膜結(jié)構(gòu)，試驗中我們以分離菌株的DNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后電泳，我們看到在746bp處出現(xiàn)了一條清晰的條