雞源沙門氏菌的分離鑒定、耐藥性檢測及耐藥基因定位.pdf

1、雞沙門氏菌病是引起雞感染的常見傳染病之一，分為雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒。這三種沙門氏菌病對養(yǎng)雞業(yè)的危害極大。隨著抗生素在動物感染和人類保健中的大量使用，近20年來沙門氏菌對抗菌藥物的耐藥性在穩(wěn)定的增長，特別是沙門氏菌多重耐藥的不斷出現(xiàn)，已經(jīng)成為公共衛(wèi)生和農(nóng)產(chǎn)品安全關(guān)注的熱點。本試驗旨在對重慶地區(qū)分離劍的10株雞源沙門氏菌進行鑒定的基礎(chǔ)上分析其耐藥譜、血清學(xué)分布、耐藥質(zhì)粒攜帶狀況，并對其耐約基因進行了定位研究。 1、用常規(guī)方法從重

2、慶地區(qū)疑似沙門氏菌病雞分離劍10株沙門氏菌，通過生化反應(yīng)對病原菌進行了初步鑒定；采用玻片凝集法，用30種沙門氏菌屬診斷血清對分離菌進行了血清型分群，并根據(jù)沙門氏菌InvA基因序列設(shè)計一對引物，對分離菌InvA基因進行了PCR擴增。結(jié)果分離的10株病原兇屬于4個血清群；A群的1株(S9)，B群的1株(S6)，C1群的2株(S1、S5)，D群的6株(S2、S3、S4、S7、S8、S10)。優(yōu)勢血清群為D群，占60％；10株菌均擴增出了373

3、bp大小的目的片段。 2、根據(jù)NCCLS推薦的標準，用K—B法檢測了分離菌對21種抗菌約物的敏感性。并用堿裂解法提取10株分離菌的質(zhì)粒，通過電泳分析了其質(zhì)粒攜帶狀況，并分析了其耐藥表型與質(zhì)粒圖譜之間的關(guān)系。結(jié)果表明：分離菌均具有較強的耐藥性，對所試21種抗菌藥物的耐藥率達24％-71％。對青霉素、阿莫西林、紅霉素、四環(huán)素、利福平等臨床常用抗生素已經(jīng)完全耐藥，對復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星和諾氟沙星的耐約也比較普遍，分

4、別達80％、60％、60％、50％和50％；10株菌有6株(S1、S4、S6、S8、S9、S10)監(jiān)測到了質(zhì)粒的存在，質(zhì)粒攜帶率為60％。S1有3種大小質(zhì)粒(36kb、15kb、1.4kb)；S4有4種大小質(zhì)粒(36kb、6.8kb、4.9kb、2.2kb)：S6有3種大小質(zhì)粒(36kb、2.8kb、2.2kb)；S8有2種大小質(zhì)粒(15kb、1.8kb)；S9有5種大小質(zhì)粒(36kb、15kb、6.8kb、3.6kb、1.6kb)：S

5、10有1種大小質(zhì)粒(36kb)。10株分離菌的耐藥表型與其質(zhì)粒攜帶狀況之間不存在明顯的對應(yīng)關(guān)系。 3、用變溫—SDS法對攜帶質(zhì)粒的菌株進行質(zhì)粒消除，通過提取質(zhì)粒電泳來檢測質(zhì)粒消除狀況。對質(zhì)粒消除后的菌株與未消除的菌株進行配對約敏試驗，確定其攜帶質(zhì)粒所編碼的耐藥基因。結(jié)果6株攜帶質(zhì)粒的菌株在交替培養(yǎng)5次后，攜帶質(zhì)粒均被完全消除，消除率達100％；質(zhì)粒消除后菌株對大部分抗生素由耐藥變?yōu)槊舾校砻髻|(zhì)粒是其耐藥基因的主要載體，配對藥敏試

6、驗表明S1株由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因有阿莫西林、慶大霉素、紅霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氯霉素7種，占總耐約基因的47％；S4株由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因有阿莫西林、紅霉素、四環(huán)素3種，占總耐藥基因的6096；S6株由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因有阿莫西林、慶大霉素、紅霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、左氧氟沙星、氯霉素9種，占總耐藥基因的60％；S8由質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因有阿莫西林、紅霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氯霉素6種，占總耐藥基