非傷寒沙門氏菌耐藥性產生及增強對其毒力的影響.pdf

1、隨著對細菌耐藥機制的深入研究，人們不僅證明細菌耐藥性的出現(xiàn)與菌株長期處于環(huán)境中多種抗生素的選擇性壓力及耐藥基因通過耐藥質?；蛉旧w在菌群間的廣泛傳播或擴散有關，還發(fā)現(xiàn)細菌耐藥性的產生與其生物學特性之間可能有一定關聯(lián)，尤其對細菌的毒力可能產生一定的影響。沙門氏菌作為一種重要的人獸共患病原菌，在醫(yī)學、獸醫(yī)學和公共衛(wèi)生學上均具有重要意義。因此，為探討非傷寒沙門氏菌耐藥性產生及增強對其毒力的影響，本研究開展了以下工作：
　　 1、選擇一

2、株藥物敏感性非傷寒沙門氏菌作為親本株，采用肉湯稀釋法測定其對四環(huán)素、強力霉素、氯霉素、卡那霉素的最小抑菌濃度，然后采用次抑菌濃度體外多步誘導法構建耐藥菌株；K-B法測定15株構建菌株及親本株的耐藥表型，并采用PCR方法檢測其全基因組DNA和質粒DNA中不同耐藥基因分布情況。結果表明沙門氏菌在長期低劑量的接觸抗菌藥物后可產生耐藥性變異，形成相應的耐藥菌株，且耐藥性相對穩(wěn)定，但未能獲得相應的耐藥基因。
　　 2、采用寇氏改良法測定5

3、株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌(即親本株和DOX、TET+DOX、TET+DOX+CHL、TET+DOX+CHL+KAN耐藥菌株)對昆明小鼠的半數(shù)致死量，結果顯示，非傷寒沙門氏菌對昆明小鼠具有致病性，各感染組之間LD50無顯著差異，LD50均在108CFU數(shù)量級。
　　 3、以5株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌LD50為攻毒劑量腹腔注射昆明小鼠，分別于感染后24h、96h、168h眼球采集血，并取各組小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟制作

4、病理切片；采用流式細胞術分別檢測小鼠外周血中CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴細胞的含量；ELISA方法用于檢測小鼠血清中細胞因子IFN-γ和IL-4的濃度。剖檢結果顯示沙門氏菌感染小鼠后能夠導致典型的腸炎以及肝臟、脾臟的腫大；病理變化觀察結果表明，沙門氏菌感染能夠引起全身性敗血癥及脾臟和肝臟的炎癥反應以及，且以多重耐藥菌株炎癥反應更為嚴重。淋巴細胞檢測結果顯示，感染后不同時間各感染組小鼠體內CD3+CD4+、CD3+CD8+細胞的

5、含量與對照組相比均有所降低，CD4+/CD8+比值比對照組有所上升，表明非傷寒沙門氏菌感染機體后導致免疫抑制；但是各感染組之間CD3+CD4+、CD3+CD8+細胞的含量以及CD4+/CD8+比值差異不顯著，表明隨著非傷寒沙門氏菌耐藥性的產生及增強，其細胞免疫沒有顯著變化。細胞因子檢測結果顯示，非傷寒沙門氏菌感染小鼠后細胞因子IFN-γ的含量和IFN-γ/IL-4的比值均有所上升，IL-4的含量基本沒有變化，表明非傷寒沙門氏菌感染后主要

6、導致Th1型炎癥反應；不同耐藥譜沙門氏菌菌株之間的比較結果顯示，非傷寒沙門氏菌多重耐藥菌株炎癥反應更為嚴重。
　　 4、采用PCR方法檢測了16株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌質粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD以及rck的分布情況，結果均為陰性。
　　 綜上所述，隨著非傷寒沙門氏菌耐藥性的產生及增強，其生物學特性LD50和毒力基因均未發(fā)生明顯變化：從宿主的角度來看，不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌感染后，多重