上海地區(qū)豬源大腸桿菌和沙門氏菌的耐藥性及耐藥基因的研究.pdf

1、本試驗通過對上海地區(qū)四個區(qū)縣豬場的大腸桿菌和沙門氏菌進行耐藥監(jiān)測，不僅可以掌握耐藥菌株和耐藥基因的分布與變化趨勢，探明耐藥菌和耐藥基因的演變機制與傳播模式，對上海地區(qū)建立統(tǒng)一、規(guī)范的監(jiān)測標準提供資料和依據(jù)，而且可以指導本地區(qū)的養(yǎng)殖業(yè)主的合理使用抗菌藥物，減少抗菌藥物耐藥性的傳播，確定遏制細菌耐藥性傳播措施的可靠性和有效性，幫助有關研究機構和制藥公司有目的地開發(fā)新的抗菌藥。
　　 1.大腸桿菌和沙門氏菌的分離培養(yǎng)與鑒定對從豬場采集

2、的糞便樣品通過選擇性培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)，TSI試驗及細菌自動鑒定儀進行鑒定，結果表明:414個樣品中分離鑒定出371株大腸桿菌，35株沙門氏菌，分離率分別為為89.6％，10.9％。大腸桿菌的分離率顯著高于沙門氏菌。
　　 2.大腸桿菌和沙門氏菌的耐藥性分析豬場分離的大腸桿菌和沙門氏菌對13種養(yǎng)殖業(yè)中常用的抗菌藥物的進行耐藥性的研究，耐藥結果表明:大腸桿菌對氨芐西林、大觀霉素、復方新諾明、強力霉素、四環(huán)素、磺胺異噁唑耐藥率較高，最低

3、的耐藥率也達到了74.7％。大腸桿菌的多重耐藥率達到了95.82％，大部分集中在6～10種抗菌藥物的耐藥;沙門氏菌對氟苯尼考耐藥率較高，但對多粘菌素E則較為敏感，其中對多粘菌素E的耐藥率僅為11.4％。
　　 3.實時熒光定量PCR對產(chǎn)ESBLs的大腸桿菌基因型的檢測方法的建立采用臨床和實驗室標準化研究所(CLSI)推薦的ESBLs初篩、確證試驗方法（微量肉湯稀釋法），對從上述實驗分離到的大腸桿菌進行ESBLs的檢測，通過NCB

4、I上公布的ESBLs的四個基因型TEM、CTX-M、SHV、OXA的序列設計熒光探針的引物，建立起一種快速檢測ESBLs的熒光定量PCR的方法。結果顯示，選擇0.5μmol/L作為最佳引物濃度，選擇0.1μmol/L作為探針的最佳濃度。在重復性試驗中四個基因型的五個不同稀釋濃度的變異系數(shù)均為超過1.5％，說明重復性較好。本試驗的擴增檢測限為101拷貝/μ/L，遠遠高于普通PCR的104拷貝/μ/L，標準曲線的線性相關系數(shù)R2＞0.99。

5、本試驗可用ESBLs四個基因型的檢測。
　　 4.沙門氏菌分子分型的研究應用Ribo-PrinterMicrobial Characterization System(RP)PVUⅡ對上述分離得到的35株沙門菌進行DNA指紋圖譜的測定，并且統(tǒng)計實驗菌株相互之間的相似性關系。35株沙門氏菌中，檢測出1株豬霍亂沙門氏菌，1株阿格納沙門氏菌，檢測率分別為2.9％，分別只有一個RP型;15株腸炎沙門氏菌，檢測率為42.9％，被分成5個R