肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的污染情況、耐藥性、耐藥基因及PFGE分型研究.pdf

1、沙門氏菌是引起人類食物中毒最常見的食源性病原菌，主要引起發(fā)熱、胃腸炎、腹瀉和敗血癥。近年來沙門氏菌對抗生素的耐藥性逐年增強，且其耐藥性可通過食物鏈傳遞給人群。因此，研究沙門氏菌，特別是耐藥沙門氏菌在食品鏈的分布和傳播情況，對公共衛(wèi)生安全具有重要意義。本試驗從四川省某一重點肉雞屠宰生產(chǎn)鏈分離鑒定出189株沙門氏菌的基礎上，進行血清型、耐藥性分析，1類整合子/基因盒、gyrA和parC基因突變、磺胺類耐藥基因(sul1、sul2和sul3)

2、、四環(huán)素類耐藥基因(tet(A)、tet(B)、tet(C)和tet(G))、β-內(nèi)酰胺類耐藥基因(blaTEM、blaCTX-M和blaSHV)、氨基糖苷類耐藥基因(aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ)和氟苯尼考耐藥基因floR的PCR檢測及PFGE分型，主要結果如下。
　　1、肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的分離鑒定2012-2014年，從肉雞屠宰生產(chǎn)鏈采集肉雞盲腸樣（代表屠宰前）、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、分割雞肉和成品

3、雞肉樣品共627份，按照GB4789.4-2010的方法，并以沙門氏菌屬特異性基因invA和hut基因準確鑒定沙門氏菌。結果顯示，從樣品中準確鑒定出189株沙門氏菌，其中腸炎沙門氏菌132株，鼠傷寒沙門氏菌29株，其他沙門氏菌28株，沙門氏菌總分離率為30.1％，其中，腸炎沙門氏菌占總分離株的69.8％。屠宰前糞樣、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、分割雞肉、成品雞肉中沙門氏菌分離率分別為47.96％、18.78％、31.33％、14.00％。

4、　　2、肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的耐藥性分析采用紙片擴散法，測定了189株沙門氏菌對10種抗生素的敏感性，結果表明沙門氏菌對萘啶酸的耐藥率最高，為99.5％，對氨芐西林(87.8％)，四環(huán)素(51.9％)，環(huán)丙沙星(48.7％)，甲氧芐啶/磺胺甲噁唑(48.1％)，大觀霉素(34.4％)耐藥率較高，對氟苯尼考、慶大霉素、阿莫西林/克拉維酸、頭孢曲松耐藥率較低。189株沙門氏菌共產(chǎn)生了49種耐藥譜，多重耐藥率為60.8％。沙門氏菌多重耐藥率

5、沿屠宰生產(chǎn)鏈逐漸增加，從50.0％增加到78.6％。
　　3、耐藥沙門氏菌耐藥基因情況
　　3.1多重耐藥沙門氏菌1類整合子及基因盒115株多重耐藥沙門氏菌中1類整合子檢出率為37.4％(43/115)。其中，腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌1類整合子陽性率分別為32.9％和72.4％;成品雞肉、屠宰環(huán)節(jié)胴體表面、屠宰前糞樣和分割雞肉1類整合子檢測率分別為72.7％、38.9％、34.5％和29.0％。43株1類整合子陽性菌株中

6、，有21株擴增出不同片段大小的基因盒，測序結果表明1類整合子攜帶的基因盒為bla(OXA-30)-aadA1（β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類耐藥耐藥基因）和drfA1-orfC（季胺鹽類耐藥基因）。
　　3.2 gyrA和parC基因突變情況對188株喹諾酮耐藥的沙門氏菌gyrA基因Asp87、Ser83突變和parC基因Ser80、Glu84突變情況進行MAMAPCR檢測，結果gyrA基因Asp87和Ser83突變檢出率分別為80.5

7、％和75.0％，parC基因Ser80和Glu84突變檢出率分別為72.9％和76.6％。
　　3.3β-內(nèi)酰胺類耐藥基因?qū)?66株對氨芐西林耐藥的沙門氏菌進行blaTEM、blaSHV、blaCTX-M基因的PCR檢測，結果blaTEM檢出率最高為93.4％(155/166)，其次blaCTX-M檢出率為12.7％(21/166)，未檢測到blaSHV基因。
　　3.4氨基糖苷類耐藥基因?qū)?9株氨基糖苷類耐藥沙門氏菌進行a

8、ac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ基因的PCR檢測。79株對氨基糖苷類抗生素耐藥的沙門氏菌中，aac(3)-Ⅱ和aac(3)-Ⅳ基因檢測率分別為35.4％和53.2％，未檢測到ant(2')-Ⅰ基因。
　　3.5磺胺類耐藥基因?qū)?1株磺胺類耐藥沙門氏菌進行sul1、sul2和sul3基因的PCR檢測。91株對甲氧芐啶/磺胺甲噁唑耐藥的沙門氏菌，sul1，sul2和sul3基因檢出率分別為50.5％、97.8％和5

9、0.5％。
　　3.6四環(huán)素類耐藥基因?qū)?8株四環(huán)素耐藥的沙門氏菌進行tet(A)、tet(B)、tet(C)和tet(G)基因的PCR檢測。98株對四環(huán)素耐藥的沙門氏菌中，tet(A)、tet(B)和tet(C)基因檢測率分別為25.5％、50.0％和71.4％，未檢測到tet(G)基因。
　　3.7氟苯尼考類耐藥基因?qū)?5株氟苯尼考耐藥的沙門氏菌進行floR基因的PCR檢測。45株對氟苯尼考耐藥的沙門氏菌中，44株檢測到

10、floR基因，檢出率為97.8％。
　　3.8肉雞屠宰生產(chǎn)鏈沙門氏菌的PFGE分型采用X-bal內(nèi)切酶消化沙門氏菌DNA，利用PFGE分析189株肉雞屠宰生產(chǎn)鏈分離沙門氏菌的遺傳關系。通過PFGE電泳圖聚類分析，189株沙門氏菌PFGE條帶相似度在27.25％～100％，共產(chǎn)生了21種帶型。同一血清型沙門氏菌基本聚在一起。譜型分析結果表明，在屠宰過程中沙門氏菌有可能沿著屠宰鏈從上游環(huán)節(jié)到成品雞肉傳播的趨勢，且在屠宰過程存在環(huán)境和人