雞源性多重耐藥沙門氏菌Ⅰ類整合子與耐藥基因特征研究.pdf

1、沙門氏菌病由沙門氏菌屬(Salmonella)中的不同血清型感染各種動(dòng)物而引起的多種疾病的總稱。禽沙門氏菌病由一種或多種血清型沙門氏菌所引起的急性或慢性禽類疾病的統(tǒng)稱，主要包括雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒。這三種沙門氏菌病對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的危害極大。隨著抗菌藥物在動(dòng)物感染和飼料中的大量使用，近20年來沙門氏菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性呈現(xiàn)穩(wěn)定增長，特別是沙門氏菌多重耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，已經(jīng)成為公共衛(wèi)生和農(nóng)產(chǎn)品安全關(guān)注的熱點(diǎn)之一。
　　 本研究通過對(duì)

2、哈爾濱地區(qū)雞場(chǎng)沙門氏菌病的流行狀況進(jìn)行調(diào)查，從臨床分離了29株雞源沙門氏菌并對(duì)其進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，有13株沙門氏菌對(duì)2種或以上抗菌藥物耐藥，確定為多重耐藥沙門氏菌。然后對(duì)13株多重耐藥沙門氏菌分離株的Ⅰ類整合子和部分耐藥基因進(jìn)行PCR檢測(cè)分析，探討了Ⅰ類整合子、耐藥基因與雞源性沙門氏菌耐藥性產(chǎn)生的相關(guān)性，從而為預(yù)防沙門氏菌多重耐藥的產(chǎn)生提供理論依據(jù)。
　　 用常規(guī)方法從哈爾濱地區(qū)分離得到沙門氏菌疑似菌株，通過生化反應(yīng)對(duì)病原菌進(jìn)行了初

3、步鑒定，并采用玻片凝集法進(jìn)行血清型鑒定，確定29株為雞源沙門氏菌。根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)，用K-B法檢測(cè)了29株臨床分離沙門氏菌對(duì)10種抗菌藥物的敏感性，結(jié)果表明，對(duì)四環(huán)素、氨芐西林、頭孢唑啉、氯霉素、復(fù)方磺胺、慶大霉素，卡那霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星的耐藥率分別為44.82％、31.03%、10.34%、3.44%、41.37%、0、0、37.93%、37.93%、37.93%，其中13株為雞源多重耐藥沙門氏菌。
　　

4、 通過PCR的方法檢測(cè)13株多重耐藥雞源沙門氏菌攜帶耐藥基因和Ⅰ類整合子的情況，分析這些分離株的耐藥基因和Ⅰ類整合子關(guān)系。根據(jù)GenBank中發(fā)表的耐藥基因的序列，設(shè)計(jì)11對(duì)擴(kuò)增耐藥基因和Ⅰ類整合子的引物，對(duì)13株臨床分離多重耐藥雞源沙門菌株進(jìn)行耐藥基因和Ⅰ類整合子的檢測(cè)，PCR擴(kuò)增結(jié)果與抗菌藥物敏感性表型基本一致。雞源沙門氏菌的耐藥表型主要為AMP-CIP-OFL-NOR-SXT-TET通常攜帶blatem-1、tetA、tetB、

5、sul1、sul2和qnr基因，研究表明雞源多重耐藥沙門氏菌的耐藥譜為5種以上的都含有Ⅰ類整合子，13株多重耐藥沙門氏菌有8株攜帶Ⅰ類整合子。
　　 通過質(zhì)粒接合試驗(yàn)驗(yàn)證13株多重耐藥雞源沙門氏菌Ⅰ類整合子的可移動(dòng)性，結(jié)果表明：含有Ⅰ類整合子的耐藥菌經(jīng)接合后，受體菌中均檢出Ⅰ類整合子，說明Ⅰ類整合子可攜帶耐藥基因以質(zhì)粒為載體，在不同菌種之間進(jìn)行傳播，使其編碼的抗菌藥物抗性進(jìn)行水平傳遞。耐藥基因在接合過程也隨整合子發(fā)生轉(zhuǎn)移，賦予被