鳙魚性別特異片段的篩選和克隆.pdf

1、關(guān)于動物性別的研究一直深受人們的關(guān)注,以哺乳動物為代表已取得了許多可喜的成果。魚類在脊椎動物進化系統(tǒng)中處于處于承前啟后的地位,具有很豐富的生物學(xué)特征以及重大的經(jīng)濟價值,是在脊椎動物中種類最多,分布又最廣的類群,因此,對魚類性別決定機制的研究具有重要的意義。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的魚類的性染色體類型只占很小的比例,其性染色體和常染色體很難進行區(qū)分在外形上,是因為魚類的性染色體處于動物染色體進化的原始狀態(tài)。利用傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)很難檢測到在魚類中雌

2、雄個體基因組水平上的差異,但是隨著生物分子學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,把分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于尋找魚類性別特異片段的成功事例不斷出現(xiàn),為鑒定魚類的遺傳性別奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究以鳙魚為實驗材料,利用RAPD指紋分析和ISSR掃描及Southern雜交技術(shù)對其開展了一系列分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究。鳙魚[Aristichthys nobilis(Richardson)]屬于鯉形目,鯉科,鰱亞科,鳙屬。我國各大水系均有此魚,分布于亞洲東部,以長江流域

3、中、下游地區(qū)為主要產(chǎn)地。我國淡水養(yǎng)殖業(yè)中的“四大家魚”之一,是我國重要經(jīng)濟魚類,在我國鯉科魚類中具有很重要的經(jīng)濟價值。本研究是首次利用分子標(biāo)記尋找鳙魚的性別特異片段。
　　 本研究利用采自河南省水產(chǎn)研究院詹店養(yǎng)殖基地的鳙魚為材料,選擇420條長10bp的隨機引物和77條ISSR引物分別對鳙魚不同性別的DNA池和不同個體的基因組DNA進行RAPD指紋分析和ISSR掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在隨機引物S1269和ISSR引物ISSR-65擴增中

4、雌性個體都出現(xiàn)了一條特異片段,經(jīng)克隆和堿基測序后,發(fā)現(xiàn)該片段長600bp和754bp。根據(jù)該片段堿基序列分別設(shè)計一對特異引物,以雌雄個體基因組DNA為模板進行PCR擴增,管家基因β-actin作為陽性對照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨機引物S1269在雌雄個體中都有,只有ISSR引物ISSR-65在雌性個體中出現(xiàn)特異擴增產(chǎn)物。利用地高辛對該片段進行標(biāo)記作為探針,斑點雜交和Southern雜交顯示,陽性信號出現(xiàn)于雌性個體中,而在雄性個體中沒有發(fā)現(xiàn)任何雜交