雷蒙德氏棉、達(dá)爾文氏棉BAC文庫的構(gòu)建及特異單克隆的篩選.pdf

1、雷蒙德氏棉(Gossypium raimondii)是二倍體D5基因組棉種，是棉屬中基因組最小(880Mb)的棉種，也是目前異源四倍體D亞組公認(rèn)的可能供體種之一。雷蒙德氏棉具有提高產(chǎn)量，提升纖維品質(zhì)，并具有抗旱、抗黃萎病及抗棉鈴蟲、葉蟬、薊馬、卷葉蟲等的潛質(zhì)。雷蒙德氏棉基因組測序的完成，為挖掘其豐富的野生型資源打下基礎(chǔ)。
　　達(dá)爾文氏棉(Gossypium darwinii)是四倍體(AD)5基因組棉種，其主要布于加拉帕哥斯群島，

2、其野生環(huán)境惡劣，擁有抗干旱、干熱風(fēng)、耐鹽堿等潛在價(jià)值。達(dá)爾文氏棉的耐鹽堿性狀使其在棉花抗性育種中具有重要的研究價(jià)值。
　　CCICR(Chinese Central Institute of Cotton Research)是被最新鑒定出的一個(gè)棉屬特有的轉(zhuǎn)座子家族，其在棉花A基因組和D基因組棉種序列所占比例差異巨大，在A基因組序列中占36.2％，在D基因組中所占比例幾乎為零，因此被認(rèn)為是造成棉花A和D基因組大小差異的主要原因。通過

3、已有棉種BAC文庫篩選含有CCICR的特異單克隆為后續(xù)深入分析其在棉屬中的進(jìn)化、分布情況打下基礎(chǔ)。
　　本文基于已有的二倍體和四倍體棉種BAC文庫的構(gòu)建方法，以雷蒙德氏棉和達(dá)爾文氏棉為材料，成功構(gòu)建了野生棉雷蒙德氏棉和達(dá)爾文氏棉的BAC文庫。并用已有的關(guān)于CCICR的SSR分子標(biāo)記引物NAU1202從海島棉Pima90-53、達(dá)爾文氏棉和毛棉中篩選出含有CCICR的單BAC克隆。取得了如下研究成果：
　　1、本文以雷蒙德氏棉

4、和達(dá)爾文氏棉為材料，以pIndigoBAC-5(Hind III)和pHZAUBAC1為載體，分別構(gòu)建了雷蒙德氏棉和達(dá)爾文氏棉BAC文庫。其中雷蒙德氏棉BAC文庫共包含26,880個(gè)克隆，平均插入片段為127kb，覆蓋該棉種全基因組的3.7倍左右，克隆空載率小于5%。達(dá)爾文氏棉BAC文庫有200832個(gè)克隆，覆蓋達(dá)爾文氏棉基因組10倍，平均插入序列長度為122kb，克隆空載率小于5%。經(jīng)檢測，重組BAC-DNA能夠在大腸桿菌中穩(wěn)定遺傳，

5、文庫的穩(wěn)定性符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。
　　2、用陸地棉遺傳連鎖群的SSR引物NAU1201，采用三級(jí)PCR方法篩選海島棉Pima90-53、達(dá)爾文氏棉和毛棉文庫。共得到30個(gè)含有CCICR的單BAC克隆。具體結(jié)果如下：海島棉Pima90-53中得到31-G-32、37-F-10、42-C-10、170-G-11、170-G-12、170-G-13、242-C-11、299-I-16、299-N-20、317-K-22、317-L-22；