MiR-134下調(diào)ABCC1的表達(dá)增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對阿霉素敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：miR-134在某些腫瘤中表達(dá)上調(diào)，但在包括乳腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)，已證實(shí)miR-134能在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中下調(diào)多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP1/ABCC1的表達(dá)來增加細(xì)胞對阿霉素的敏感性。但miR-134和ABCC1在阿霉素耐藥性乳腺癌中的表達(dá)情況及對細(xì)胞耐藥性的影響還未十分明確。本研究旨在檢測 miR-134和 ABCC1在阿霉素耐藥性乳腺癌病理標(biāo)本和耐藥性細(xì)胞株中的表達(dá)及相互關(guān)系，并探討miR-134在乳腺癌細(xì)胞阿霉素

2、耐藥過程中的作用。
　　方法：⑴實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測非耐藥癌旁組織（ASPT）、非耐藥乳腺癌組織（ASBC）以及阿霉素耐藥癌旁組織（ARPT）和阿霉素耐藥性乳腺癌組織（ARBC）中 miR-134的表達(dá)。同時(shí)檢測阿霉素耐藥性乳腺癌細(xì)胞株 MCF-7/ADR與非耐藥乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中miR-134的表達(dá)。⑵采用qRT-PCR和Western Blot法評估ASPT、ASBC、ARPT和ARBC組織中ABC

3、C1的表達(dá)變化。同時(shí)檢測MCF-7/ADR細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中ABCC1的表達(dá)情況。⑶miR-134 mimics和NC分別轉(zhuǎn)染入MCF-7/ADR細(xì)胞，qRT-PCR驗(yàn)證miR-134的過表達(dá)情況。qRT-PCR、Western Blot和免疫組化檢測MCF-7/ADR細(xì)胞中ABCC1的表達(dá)。⑷MTT法明確轉(zhuǎn)染miR-134 mimics的MCF-7/ADR細(xì)胞的IC50值，在IC50濃度阿霉素的作用下，MTT法檢測過表達(dá)miR-1

4、34的MCF-7/ADR細(xì)胞增殖情況。⑸在IC50濃度阿霉素的作用下，TUNEL法及流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)miR-134的MCF-7/ADR細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：①乳腺癌組織中miR-134的表達(dá)均顯著低于癌旁組織(p<0.001)。miR-134在ARBC組織中的表達(dá)顯著低于ASBC組織(p<0.001)，同時(shí)miR-134在MCF-7/ADR細(xì)胞中的表達(dá)顯著低于MCF-7細(xì)胞(p<0.01)。②ABCC1在乳腺癌組織中的m

5、RNA水平和蛋白表達(dá)水平均顯著高于相應(yīng)癌旁組織(p<0.001)。ABCC1在ARBC組織中的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平均顯著高于ASBC組織(p<0.05)，同時(shí)ABCC1在MCF-7/ADR細(xì)胞中的mRNA水平和蛋白水平均顯著高于MCF-7細(xì)胞(p<0.001)。③與NC組MCF-7/ADR細(xì)胞相比，miR-134 mimics組細(xì)胞中miR-134的表達(dá)明顯增加(p<0.001)。過表達(dá)miR-134后，MCF-7/ADR細(xì)胞中A

6、BCC1表達(dá)在mRNA水平上無明顯變化，但在蛋白水平上顯著降低(p<0.001)。④過表達(dá)miR-134的MCF-7/ADR細(xì)胞的IC50值為226ng/ml。過表達(dá)miR-134的MCF-7/ADR細(xì)胞在226ng/ml阿霉素作用下，細(xì)胞增殖能力較對照組明顯下降，在48h時(shí)即與對照組形成顯著性差異(p<0.05)，并隨著時(shí)間推移，抑制程度更加明顯(p<0.01)。⑤過表達(dá)miR-134的MCF-7/ADR細(xì)胞在226ng/ml阿霉素作