2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、分類號:R73057密級:學(xué)位類別:科學(xué)學(xué)位團專業(yè)學(xué)位口◇學(xué)校代碼:10062學(xué)號:2011602486學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)又坪簣科鼻辱TlAlIJl麓■EDlCALU麓IV蠢曬nN碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTIATION論文題目:過表達RIP3增強乳腺癌細胞對小白菊內(nèi)酯的敏感性的作用機制研究TITLEOverexpressionofRIP3sensitizeshumanbreastcancercellstoparthenoli

2、de—inducedapoptosis一級學(xué)科:臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科:腫瘤學(xué)論文作者:路燦指導(dǎo)教師:佟仲生教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的:構(gòu)建含有RIP3基因的真核表達載體,研究過表達RIP3基因?qū)π“拙諆?nèi)酯抗乳腺癌細胞作用的影響及機制。為其作為抗乳腺癌新藥的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法:反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)檢測及比較4株人乳腺癌細胞系MCF7,MDAMB231,MDAMB435,T47

3、D及正常人乳腺上皮細胞MCFl0A中RIP3mRNA的表達水平。以正常人乳腺上皮細胞MCFl0A反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板,PCR擴增RIP3基因cDNA全長,將合成的RIP3基因克隆入mCherry載體的N末端,構(gòu)建重組質(zhì)粒mCherryRIP3,測序證實mCherryRIP3重組質(zhì)粒構(gòu)建正確與否。通過慢病毒法構(gòu)建穩(wěn)定過表達RIP3的MCF7及MDAMB23l乳腺癌細胞株。熒光顯微鏡下觀察mCherryRIP3蛋白在MCF7及MDAMB23

4、1細胞內(nèi)的表達效率及定位。RTPCR及WesternBlot檢測目的基因RIP3在MCF一7及MDAMB23l細胞內(nèi)mRNA及蛋白質(zhì)的表達水平。用不同濃度小白菊內(nèi)酯分別處理過表達RIP3及表達空載體乳腺癌細胞,顯微鏡下觀察不同處理組乳腺癌細胞形態(tài)的變化,熒光顯微鏡下觀察不同處理組乳腺癌細胞核形態(tài)的改變,MTT比色法檢測不同處理組乳腺癌細胞增殖的變化及量效關(guān)系,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡及細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,WesternBlot檢測

5、PARP蛋白及其裂解片段表達水平,小白菊內(nèi)酯處理細胞的同時加用抗氧化劑NAC(N乙酰半胱氨酸,N—acetyl—Lcysteine),MTT法檢測乳腺癌細胞增殖的變化。結(jié)果:1RTPCR檢測到MCF一7,MDAMB231,MDlA—MB435,T47D細胞中砌P3基因普遍低表達,但在正常乳腺癌細胞MCFl0A中高表達。2重組載體測序鑒定該序列與GenBank中的序列相同。獲得外源性RIP3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的乳腺癌MCF7及MDAMB231細胞株

6、,熒光顯微鏡下觀察到紅色熒光蛋白表達率達90%以上,并且定位于胞質(zhì)。RTPCR及WesternBlot檢測到目的基因RIP3在轉(zhuǎn)染細胞中為過表達。3隨著小白菊內(nèi)酯濃度的增加,MCF7及MBAMB231細胞逐漸縮小變圓,細胞膜邊界不清、胞膜破裂、細胞溶解死亡,與表達空載體MCF7及MBA—MB一23l細胞相比過表達RIP3細胞出現(xiàn)上述形態(tài)變化較明顯。另外,過表達MCF7及MBAMB231細胞相比表達空載體乳腺癌細胞表現(xiàn)出更多的核固縮及碎裂

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