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文檔簡介
1、目的:探討miR-130a對PTEN基因表達的調控,以及它們與乳腺癌MCF-7細胞株阿霉素耐藥的關系。
方法:利用miRNA芯片結合RT-qPCR的方法檢測并驗證miR-130a在人乳腺癌親代敏感細胞(MCF-7/S)、同系阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)和多西紫杉醇耐藥細胞(MCF-7/Doc)中的表達差異;通過靶基因預測軟件預測PTEN可能為miR-130a的特異性靶基因;通過miR-130a模擬物(mimics)和抑
2、制物(inhibitors)轉染實驗結合MTT法、RT-qPCR和免疫印跡法,觀察miR-130a的表達變化對乳腺癌細胞阿霉素耐藥性的影響及其與PTEN基因表達間的關系。
結果:與MCF-7/S相比,miR-130a在MCF-7/Adr中的表達水平明顯增高(116834.70±4728.32倍;t=19.035,P=0.000),但在多西紫杉醇耐藥株MCF-7/Doc中的表達無統(tǒng)計學差異(t=0.703,P=0.521)。MC
3、F-7/S細胞轉染miR-130amimics后,與陰性對照組相比,其miR-130a表達水平明顯增高(17.686±1.057倍;t=8.360,P=0.001),對Adr的耐藥性增強[IC50:(0.606±0.164)mg/L vs(0.181±0.060)mg/L; t=5.200,P=0.007],同時PTEN mRNA和蛋白表達水平明顯下調,分別為陰性對照組的0.362±0.076倍(t=2.927,P=0.043)和0.3
4、86±0.020倍(t=20.713,P=0.0003);而MCF-7/Adr轉染miR-130a inhibitors后,其miR-130a表達水平是陰性對照組的0.169±0.035倍(t=12.036,P=0.0002),對Adr的耐藥性明顯減弱[IC50:(23.366±1.304)mg/L vs(46.206±1.963)mg/L; t=16.784,P=0.007],同時PTEN mRNA和蛋白表達水平均明顯上調,分別是陰性
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