乳腺癌內分泌治療敏感性調節(jié)研究.pdf

1、乳腺癌細胞內分泌治療敏感性調節(jié)的研究 復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科 博士研究生范江導師沈鎮(zhèn)宙教授研究目的 應用DNA甲基轉移酶抑制劑AZA聯(lián)合組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA作用于乳腺癌細胞株MDA-MB-435，研究是否能夠通過這兩種藥物誘導雌激素受體陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-435重新表達功能性的雌激素受體Q，并探討經過藥物誘導重新表達雌激素受體Q后其生物學特性的變化以及對于內分泌治療的敏感性的改變。

2、 材料與方法 1．聯(lián)合應用AZA(5-aza-2’deoxycytidine)；TSA(trichostatinA)與作用于乳腺腫瘤細胞MDA-MB一435，應用RT-PCR的方法檢測MDA-MB-435細胞株ERQ，PR以及PS2的mRNA表達水平的改變。 2．通過WST方法來檢測乳腺癌細胞的增殖能力變化，將MDA-MB-435細胞根據(jù)藥物處理共分四組：①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+4—0HTAM組④4—0

3、HTAM組。同時分析誘導后的MDA-MB一435在不同雌激素濃度中的增殖能力。 3．將MDA-MB-435分為六組，分別以AZA濃度梯度為Oumol／L；1umol／L；2．5umol／L：5umol／L；10umol／L；20umol／L聯(lián)合TSAl00ng／ml六個處理組來誘導MDA-MB-435細胞株。藥物處理96小時后以WST法來測定腫瘤細胞增殖能力的變化。并且測定聯(lián)合4-OHTAM作用后MDA-MB-435的增殖能力情

4、況。 4．采用流式細胞儀來分析腫瘤細胞周期分布的改變，將MDA-MB-435分成另外四組：①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+E2組④AZA+TSA+E2+4—0HTAM組。 5．建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型，將MDA-MB-435分為三組①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+卵巢切除組以進一步驗證藥物誘導后的腫瘤細胞的成瘤能力以及對于雌激素水平的依賴性。 研究結果 1．TSA以及AZA聯(lián)合應

5、用能使腫瘤細胞MDA-MB-435重新恢復ERQ，PR以及PS2的mRNA表達。 2．增殖分析的四個組中：第②組AZA+TSA細胞增殖能力較對照組減弱(p(O．01)。第③組AZA+TSA+4-OHTAM增殖能力進一步減弱(p

6、AZA濃度梯度的增殖能力測定中在本試驗中觀察到在誘導濃度為AZA2．5umol／L、TSA為lOOng／ml時聯(lián)合4-OHTAM時MDA-MB一435增殖能力下降最明顯。 4．細胞周期流式細胞儀分析的四個組中：第②組經過AZA聯(lián)合TSA聯(lián)合誘導后的MDA-MB-435出現(xiàn)顯著的S期阻滯(73．84±0．22％)；第③組：AZA+TSA誘導后并加入雌激素后細胞阻滯稍減弱(62．¨±O．18％)。第④組(AZA+TSA+E2+4-O

7、HTAM)AZA+TSA誘導后并加入雌激素并且同時加入4—0HTAM組中細胞S期阻滯再次提高(77．13±0．31％)。 5．體內試驗：誘導處理后的MDA-MB-435之移植瘤在體內較未經處理的細胞增殖能力下降(p