MTDH在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其與細(xì)胞藥物敏感性的關(guān)系.pdf

1、目的:MTDH又被稱(chēng)為L(zhǎng)YRIC，AEG-1和3D3，作為一個(gè)癌基因，可在全身多種腫瘤中過(guò)表達(dá)[1]。目前的研究發(fā)現(xiàn)，MTDH與多種腫瘤的增殖，侵襲以及耐藥有關(guān)。在乳腺癌中也發(fā)現(xiàn)了MTDH的過(guò)表達(dá)，MTDH在乳腺癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中也起到一定作用，并且可以作為一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素來(lái)評(píng)估預(yù)后。MTDH的過(guò)表達(dá)可能與乳腺癌的耐藥有關(guān)，在對(duì)乳腺癌的臨床治療過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)不同乳腺癌患者對(duì)于藥物的敏感性不盡相同，或者在化療過(guò)程中出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象。藥物耐藥性

2、是導(dǎo)致乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、治療效果差的的一個(gè)重要因素。MTDH的過(guò)表達(dá)提高腫瘤細(xì)胞的耐藥性的具體機(jī)制尚不完全清楚，目前的研究提示可能存在以下機(jī)制:(1)MTDH可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，促使細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，通過(guò)減少G期細(xì)胞數(shù)量來(lái)降低化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響;(2)MTDH的過(guò)表達(dá)可以上調(diào)多元抗藥性基因(multidrugresistancegene1MDR1)，使得細(xì)胞內(nèi)的化療藥物濃度達(dá)不到有效水平;(3)MTDH過(guò)表達(dá)使藥物代謝酶基因表達(dá)

3、上調(diào)。例如近期研究發(fā)現(xiàn)MTDH與肝癌對(duì)5-氟尿嘧啶、多烯紫杉醇、順鉑等多種化療藥物耐藥有關(guān)。人肝癌細(xì)胞中MTDH過(guò)表達(dá)引起藥物代謝酶DPYD、CYP2B6和ARK1C2的表達(dá)上調(diào)，也會(huì)提高轉(zhuǎn)錄因子LSF/TFCP2的表達(dá)水平[2]。
　　 抑制MTDH基因可能會(huì)在腫瘤的治療中起到良好的效果。在LiuH等[4]的實(shí)驗(yàn)中表明敲除MTDH基因可以提高多種不同類(lèi)型的乳腺癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的敏感性。其中在對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞株的研究

4、表明[5]利用siRNA技術(shù)敲除MTDH后，β-catenin、LEF-1的表達(dá)降低，并且CyclinD的水平也下降，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢，凋亡率增高。Yoo等[6]則采用慢病毒轉(zhuǎn)染siRNA技術(shù)沉默種植肝細(xì)胞癌裸鼠的MTDH，結(jié)果發(fā)現(xiàn)增加了5-FU、多烯紫杉醇的藥物作用。下調(diào)MTDH基因表達(dá)可使非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖明顯受到抑制并增強(qiáng)其對(duì)順鉑的敏感性[8]。
　　 目前的研究主要集中在MTDH的作用及其機(jī)制

5、，但是關(guān)于不同分子特征的乳腺癌細(xì)胞株MTDH的表達(dá)水平與藥物敏感性的關(guān)系的研究比較少見(jiàn)。本研究旨在測(cè)定分子特征不同的幾種乳腺癌細(xì)胞中MTDH的表達(dá)水平及幾種細(xì)胞的藥物敏感性，進(jìn)而判斷MTDH與藥物敏感性之間的關(guān)系。從而尋找一種可對(duì)乳腺癌評(píng)估預(yù)后并指導(dǎo)治療的獨(dú)立指標(biāo)。
　　 方法:選擇四種乳腺癌細(xì)胞株，分別為:MDA-MB-231(ER-，PR-)、MCF-7(ER+，PR+)、MDA-MB-435S(ER-，PR-高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株)

6、、MCF-7/ADR（耐阿霉素細(xì)胞株）。通過(guò)realtimePCR法測(cè)定四種細(xì)胞中MTDH的mRNA表達(dá)水平，同時(shí)通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定蛋白表達(dá)水平，通過(guò)MTT法檢測(cè)四種細(xì)胞對(duì)1mg/L的阿霉素及8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)的藥物敏感性，以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析四種乳腺癌細(xì)胞的MTDH表達(dá)水平及藥物敏感性是否存在差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.四種乳腺癌細(xì)胞中MTDHmRNA表達(dá)水平的檢測(cè)
　　 通過(guò)realti

7、mePCR法檢測(cè)四種細(xì)胞MTDH基因相對(duì)表達(dá)水平，四種乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435S、MCF-7/ADR中MTDH的表達(dá)水平分別為1.11±0.10、17.58±3.11、49.66±10.77、201.74±14.57。統(tǒng)計(jì)分析后顯示，四種細(xì)胞的MTDH表達(dá)兩兩之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。（見(jiàn)Fig.1-4，Table1）
　　 2.四種乳腺癌細(xì)胞中MTDH蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)

8、>　　 通過(guò)流式細(xì)胞法檢測(cè)四種細(xì)胞MTDH蛋白表達(dá)水平，四種乳腺癌細(xì)胞:MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435S、MCF-7/ADR中MTDH的表達(dá)水平分別為307.18±8.06、334.65±5.55、399.31±4.78、500.66±5.06。統(tǒng)計(jì)分析后顯示，四種細(xì)胞的MTDH表達(dá)兩兩之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。（見(jiàn)Fig.5,Table1)
　　 3.四種乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素藥物敏感性的檢測(cè)

9、
　　 通過(guò)MTT法檢測(cè)四種細(xì)胞對(duì)1mg/L的阿霉素在24h時(shí)的藥物敏感性:1mg/L的阿霉素在24h時(shí)對(duì)MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435S、MCF-7/ADR的抑制率分別為61.69％±2.04％、48.44％±1.53％、30.16％±0.95％、15.51％±0.63％。統(tǒng)計(jì)分析后顯示阿霉素對(duì)四種細(xì)胞的抑制率兩兩之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。（見(jiàn)Table2）
　　 4.四種乳腺癌細(xì)胞

10、對(duì)紫杉醇藥物敏感性的檢測(cè)
　　 通過(guò)MTT法檢測(cè)四種細(xì)胞對(duì)8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)的藥物敏感性:8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)對(duì)MDA-MB-231、MCF-7、MDA-MB-435S、MCF-7/ADR的抑制率分別為58.14％±1.71％、43.03％±1.34％、37.59％±2.30％、22.99％±1.78％。統(tǒng)計(jì)分析后顯示紫杉醇對(duì)四種細(xì)胞的抑制率兩兩之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。（見(jiàn)Table2）
　

11、　 結(jié)論:
　　 1.在四種乳腺癌細(xì)胞中，MTDH表達(dá)量由低到高分別為MDA-MB-231,MCF-7,MDA-MB-435S,MCF-7/ADR，其中MDA-MB-435S為乳腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移株，MCF-7/ADR為乳腺癌細(xì)胞耐阿霉素株，且均為MTDH高表達(dá)株，從而提示MTDH的過(guò)表達(dá)可能與乳腺癌細(xì)胞的侵襲性和耐藥有關(guān);
　　 2.在四種乳腺癌細(xì)胞中，MTDH的表達(dá)越高，細(xì)胞株對(duì)阿霉素的藥物敏感性越低，提示MTDH的高