過表達(dá)miR-26a增強(qiáng)肝癌細(xì)胞脫落凋亡敏感性的機(jī)制研究.pdf

1、microRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。肝細(xì)胞癌為最多發(fā)的惡性腫瘤之一，存在microRNA表達(dá)譜異常。以往研究表明microRNA與已知的肝癌主要相關(guān)信號通路相關(guān)聯(lián)，即microRNA的表達(dá)異常參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展。另一方面，把microRNA人工導(dǎo)入細(xì)胞，可以成功地糾正與microRNA表達(dá)下調(diào)相關(guān)的表型，這也為microRNA用于肝癌的生物治療提供了重要依據(jù)。
　　miR-26a家族包括miR-26a-1和miR-

2、26a-2兩個(gè)成員。以往研究表明：miR-26a的下調(diào)與肝癌的發(fā)生存在正相關(guān)，并且miR-26a下調(diào)的肝癌患者具有較低的生存率。有報(bào)道表明，miR-26a能夠直接抑制CCND2和CCNE2的表達(dá)，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的增殖。但在臨床實(shí)踐中，約90％的腫瘤患者死于轉(zhuǎn)移，所以在肝癌中研究miR-26a與轉(zhuǎn)移的關(guān)系便變得十分重要。
　　在本研究中，通過生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)回顧，我們將研究重點(diǎn)放在miR-26a與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的脫落凋亡的關(guān)

3、系上。首先，為研究miR-26a與肝癌細(xì)胞脫落凋亡的關(guān)系，我們建立了體內(nèi)外的脫落凋亡模型，并在以上模型中證實(shí)過表達(dá)miR-26a能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞脫落凋亡的敏感性。其次，為明確miR-26a促進(jìn)肝癌細(xì)胞脫落凋亡的分子機(jī)制，我們利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot等多種方法證實(shí)ITGA5在肝癌中是miR-26a直接調(diào)控的靶基因，并且發(fā)現(xiàn)干涉ITGA5與過表達(dá)miR-26a具有相似的生物學(xué)表型，均能夠增強(qiáng)肝癌細(xì)胞

4、脫落凋亡的敏感性。最后，為充分說明miR-26a與ITGA5在肝癌細(xì)胞脫落凋亡中的關(guān)系，我們在過表達(dá)miR-26a的肝癌細(xì)胞中再次過表達(dá)ITGA5進(jìn)行“恢復(fù)”實(shí)驗(yàn)。利用流式凋亡檢測等方法證實(shí)，成功過表達(dá)ITGA5后肝癌細(xì)胞脫落凋亡敏感性降低。綜上所述，我們認(rèn)為在肝癌中存在如下的調(diào)控關(guān)系，即miR-26a通過直接抑制ITGA5進(jìn)而增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的脫落凋亡敏感性。
　　結(jié)合文獻(xiàn)回顧和我們的研究，肝癌中miR-101和miR-26a均是重

5、要的抑癌microRNA。將其聯(lián)合使用用于肝癌治療將起到事半功倍的效果。但在輸送的過程中，由于單次輸送載量有限，所以當(dāng)同時(shí)輸送兩種microRNA時(shí)，其中每一種microRNA的輸送數(shù)量便會(huì)相對減少，即該microRNA所具備的治療效果會(huì)降低。為保證治療效果，增強(qiáng)單個(gè)雙鏈microRNA分子的功能是十分必要的。
　　在本研究中，我們將兩種成熟形式的雙鏈microRNA各取其包含種子區(qū)的一半進(jìn)行拼接，組合成人工設(shè)計(jì)的“嵌合micro