正元膠囊防治癌因性疲乏的療效及機制研究.pdf

1、目的:通過臨床資料分析及建立癌因性疲乏(CRF)肺癌裸小鼠模型，評價正元膠囊防治由腫瘤本身及化療所引起的CRF的療效，并明確中藥復(fù)方正元膠囊緩解CRF的作用機制。
　　方法:
　　1.臨床研究部分:使用Piper疲乏修訂量表、自制中醫(yī)辨證表，對191例CRF患者的疲乏程度與中醫(yī)證型進行分析，結(jié)合該科既往研究結(jié)果，探討正元膠囊防治癌因性疲乏的中醫(yī)理論依據(jù)。
　　2.動物實驗部分:建立A549肺腺癌移植瘤裸小鼠模型。180

2、只裸小鼠，隨機抽取20作為正常對照(NC)組，不接種A549細胞，其余為接種A549細胞。接種完后，當瘤塊長到50mm3-100mm3（接種后第7天）的時候，隨機分為8組，每組20只。全部小鼠分為9組，即正常對照(NC)組、癌模型(TC)組、正元膠囊低劑量(ZD)組、正元膠囊中劑量(ZZ)組、正元膠囊高劑量(ZG)組，順鉑(P)組，正元膠囊低劑量+順鉑(LD)組、正元膠囊中劑量+順鉑(LZ)組、正元膠囊高劑量+順鉑(LG)組。中藥(Z)

3、組包括三個劑量亞組（ZD、ZZ、ZG組），聯(lián)合(L)組包括三個劑量亞組（LD、LZ、LG組）。參考藥物等效劑量公式，設(shè)定正元膠囊低劑量組給藥劑量為0.45g/kg，中劑量組為0.9g/kg，高劑量組為1.8g/kg，灌胃，每天1次。順鉑的給藥劑量為5 mg/kg，腹腔注射，每3天一次。分組后（A549細胞接種第7天）開始給藥，每天一次，連續(xù)21天。正常對照組和癌模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水灌胃。
　　通過觀察并記錄實驗過程中小鼠的

4、一般情況、體重、瘤體體積，并進行力竭游泳實驗、懸尾實驗、曠場實驗，檢測肝糖原含量，評價正元膠囊防治癌因性疲乏的療效;運用流式細胞技術(shù)、瑞姬氏染色、ELISA、細胞因子抗體芯片技術(shù)，檢測外周血細胞計數(shù)、骨髓有核細胞計數(shù)、骨髓細胞涂片、細胞因子、皮質(zhì)酮、T3、T4等，初步闡明正元膠囊防治CRF的作用機制。
　　結(jié)果:
　　1.臨床研究表明，脾氣虛出現(xiàn)率最高，占80.6％，其次為腎氣虛，占43.5％;有脾陽虛、肝氣郁結(jié)的患者疲勞程

5、度偏重，疲乏得分偏高;有腎陽虛、腎氣虛的患者疲勞程度偏重，疲乏得分偏高。
　　2.正元膠囊對CRF小鼠的藥效學(xué)研究
　　(1)正元膠囊對荷瘤小鼠一般情況的影響。干預(yù)前，各組小鼠一般情況，包括體重均衡。干預(yù)3周后，小鼠一般情況從相對較好到差依次為NC組、ZD組、ZZ組、ZG組、TC組、LZ組、LD組、LG組、P組。荷瘤小鼠體重，NC組＞TC組（P=0.023），L組＞P組（P=0.024），表明正元膠囊能緩解化療所致的CRF小

6、鼠體重減輕。
　　(2)正元膠囊對荷瘤小鼠軀體性疲勞的影響。不同組小鼠在干預(yù)前力竭游泳時間均衡，干預(yù)18天時，TC組較NC組力竭游泳時間縮短;Z組各劑量亞組時間均較TC組延長;L組各劑量亞組時間均較P組明顯延長;L組各劑量亞組時間較TC組延長;LG組較LD組、較LZ組（P=0.017）游泳時間均延長。正元膠囊能延長腫瘤及化療引起的CRF小鼠力竭游泳時間縮短，緩解軀體性疲勞;聯(lián)合化療時，高劑量組游泳時間最長，即高劑量正元膠囊緩解順鉑

7、化療引起的軀體性疲勞效果更佳。
　　肝糖原的檢測結(jié)果表明，TC組與NC組間無統(tǒng)計學(xué)差異，Z組肝糖原較TC組上升，L組較P組上升，L組較TC組上升。正元膠囊能增加未化療及接受化療的CRF小鼠的肝糖原儲備，有助于緩解疲勞。
　　(3)正元膠囊對荷瘤小鼠精神性疲勞的影響。懸尾實驗表明，TC組不動時間較NC組延長。Z組較TC組顯著縮短，L組較P組顯著縮短。正元膠囊能縮短腫瘤及化療所致的懸尾不動時間延長。
　　曠場實驗表明，NC

8、組總運動距離（P=0.040）、外周格運動距離（P=0.039）、平均速度（P=0.040）均高于TC組，中央格運動距離（P=0.046）低于TC組，休息時（P=0.351）、大便粒數(shù)（P=0.228）兩組間無差別。Z組中央格運動距離較TC組明顯縮短。L組總運動距離（P=0.018）、外周格運動距離（P=0.002）、平均速度較P組上升，中央格運動距離較P組顯著下降。休息時間在各組荷瘤小鼠間并未發(fā)現(xiàn)有明顯差異。大便粒數(shù)，Z組最多，P組最

9、少。正元膠囊能改善CRF小鼠的曠場運動情況。
　　(4)正元膠囊對荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用。P組(P=0.001)、L組（P＜0.001)、Z組（P=0.030）的瘤重較TC組均有減輕，Z組、L組、P組的抑瘤率分別為26.9％、60.0％、57.1％。干預(yù)19d時，P組瘤體體積小于TC組（P=0.019）、L組瘤體體積小于TC組。正元膠囊能在一定程度上抑制腫瘤生長，與化療藥物順鉑配合，能進一步縮小腫瘤，提高抑瘤率。
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10、.正元膠囊對CRF小鼠造血及免疫功能的影響。外周血WBC計數(shù)、HGB含量，骨髓有核細胞計數(shù)，均表現(xiàn)為L組＞P組（P＜0.001）;未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對RBC、PLT計數(shù)有影響。血清中細胞因子含量: EPO水平，Z組＞TC組(P=0.049)，L組＞P組（P=0.038）。G-CSF水平，L組＞P組（P=0.043）。IL-3水平，LD組＞P組（P=0.001），Z組各亞組較TC組上升（P＜0.05），ZD組＞ZG組（P=0.003），LD組

11、＞LZ組（P＜0.001)。TNF-α水平，ZG組較TC組下降（P=0.004），LZ組（P=0.013）、LG組（P=0.010）較P組下降，ZG組較ZD組（P=0.05）、ZZ組均有下降（P=0.024），LZ組（P=0.026）、LG組（P=0.021）均較LD下降。IL-6水平，ZZ組、ZG組均較TC下降（P＜0.001），LD組、LZ組、LG組均較P組下降（P＜0.001），ZZ組、ZG組較ZD組均有下降（P＜0.001），L

12、Z組較LD組（P＜0.001）、LG組（P=0.017）均有下降。IL-2水平，Z組各劑量亞組IL-2水平較TC組均上升（P＜0.05），且隨著中藥劑量上升，IL-2的上升幅度增大;LZ組和LG組IL-2水平均高于P組(P＜0.001)，且中藥劑量越高，IL-2的上升幅度越大。
　　以上結(jié)果表明正元膠囊能提高腫瘤及化療所致CRF小鼠血清EPO水平下降;提高化療所致的外周血白細胞、血色素下降，骨髓有核細胞計數(shù)減少，血清G-CSF水平

13、降低;提高血清IL-3水平，且低劑量組效果更佳;降低血清TNF-α水平，但最佳劑量未能確定;降低血清IL-6水平，且中劑量組效果更佳;還能提高血清IL-2水平，且IL-2水平隨著中藥劑量的上升而上升。未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對血清IL-1β水平有影響。此外，正元膠囊能增加化療后CRF小鼠的脾臟指數(shù)，表現(xiàn)為L組脾臟指數(shù)較P組上升(P=0.013)。
　　4.正元膠囊對CRF小鼠內(nèi)分泌功能的影響。血清T3水平，Z組＞TC組（P＜0.001）、L

14、組＞P組（P＜0.001）。血清T4水平，Z組＞TC組（P=0.002）。正元膠囊能提高CRF小鼠血清T3、T4水平;提高化療后CRF小鼠血清T3水平。未發(fā)現(xiàn)正元膠囊對血清皮質(zhì)酮有影響。
　　結(jié)論:
　　1.CRF主要涉及脾、腎，與肺、肝相關(guān)，脾氣不足、腎精虧虛、痰瘀毒結(jié)可能是CRF的病機所在。正元膠囊能益氣健脾、補腎填精，兼軟堅散結(jié)，可針對CRF的病機治療。
　　2.正元膠囊能緩解CRF小鼠的軀體性及精神性疲勞，從而