口腔過敏綜合征小鼠模型的建立與評價.pdf

1、目的：建立由花生提取物誘導(dǎo)的口腔過敏綜合征小鼠模型，并對該模型進行評價和深入探討。
　　方法：將20只6~8周齡雌性BALB/c小鼠，按隨機原則分為正常對照組和模型組，每組10只。模型組小鼠在乙醚輕度麻醉下將花生粗提取物（Crude peanut extract, CPE）和霍亂毒素（Cholera Toxin, CT）以10:1（W/W）混合致敏液（浸泡在一個棉花球上）直接接觸口腔雙側(cè)頰部黏膜，每日3次，連續(xù)14天；第15天，C

2、PE（CPE10 mg/只）通過接觸小鼠口腔黏膜和灌胃激發(fā)。對照組小鼠同時期采用相同體積無菌 PBS處理。對激發(fā)后的小鼠過敏癥狀進行評估。4h后處死小鼠，利用蘇木素-伊紅（Hematoxylin and eosin, H&E）或甲苯胺藍（Toluidine blue, TB）染色法對小鼠的口腔黏膜和空腸組織進行組織染色以及嗜酸性粒細(xì)胞（Eosinophils, EOS）和肥大細(xì)胞（Mast cell, MC）浸潤情況檢測，酶聯(lián)免疫吸附法

3、（Enzymelinked immunosorbent assay, ELISA）測定血清CPE特異性IgE（CPE-sIgE）水平，血清小鼠肥大細(xì)胞蛋白酶-1（Mouse mast cell protease-1，mMCP-1）以及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素-4（Interleukin-4， IL-4）和干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）水平。
　　結(jié)果：
　　1.過敏癥狀評估：CPE抗原經(jīng)口腔黏膜接觸和

4、灌胃激發(fā)小鼠后，小鼠全身過敏反應(yīng)5~15 min內(nèi)表現(xiàn)明顯，最初的反應(yīng)主要包括皮膚反應(yīng)與口腔和嘴唇周圍的浮腫，頻繁搔抓嘴巴和摩擦鼻子，腹瀉，活動減少，呼吸系統(tǒng)如氣喘和呼吸困難，而 PBS處理小鼠無任何過敏反應(yīng)。CPE模型組小鼠過敏癥狀評分顯著高于PBS對照組小鼠（p<0.001），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.蘇木素-伊紅染色顯示，PBS對照組小鼠口腔黏膜很少見炎癥細(xì)胞，CPE模型組小鼠口腔黏膜及黏膜下層 EOS浸潤，微小血管擴張、

5、充血。甲苯胺藍染色顯示， CPE模型組小鼠口腔黏膜出現(xiàn)大量的MC，體積較大，形態(tài)不規(guī)則，部分MC呈脫顆粒狀，PBS對照組則很少看到MC。與PBS對照組相比較，CPE模型組MC、脫顆粒MC、EOS數(shù)量均顯著增多（p<0.01），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.蘇木素-伊紅染色顯示，CPE模型組小鼠空腸絨毛參差不齊，絨毛脫落或稀疏，結(jié)構(gòu)破壞，黏膜固有層EOS數(shù)量明顯增多；PBS對照組小鼠空腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，腸絨毛排列整齊。CPE

6、模型組小鼠空腸黏膜可見較多的MC，其中有部分MC脫顆粒。與PBS對照組相比較，CPE模型組小鼠空腸MC、脫顆粒MC和EOS計數(shù)均增多（p<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.與PBS對照組相比較，CPE模型組小鼠血清CPE特異性 IgE以及mMCP-1水平均有升高（p<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.與PBS對照組相比較，CPE模型組小鼠脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-4水平升高（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而C