食物過敏幼鼠模型的建立與評(píng)價(jià).pdf

1、目的:
　　利用3周齡SD幼鼠通過卵白蛋白腹腔注射進(jìn)行基礎(chǔ)致敏、灌胃激發(fā)建立幼鼠食物過敏動(dòng)物模型并對(duì)其評(píng)價(jià)，探討建立幼鼠食物過敏動(dòng)物模型的適宜條件和評(píng)價(jià)方法。
　　方法:
　　將16只3周齡的雌性SD幼鼠隨機(jī)分為兩組，每組8只。食物過敏組以卵白蛋白為過敏原，氫氧化鋁為佐劑，通過腹腔注射致敏聯(lián)合灌胃激發(fā)進(jìn)行建模，即在第0天給予每只幼鼠腹腔注射低劑量卵白蛋白和氫氧化侶混懸液共0.2ml(含卵白蛋白40μg，氫氧化鋁1mg)

2、，在第2、4、7、9、11天腹腔注射低劑量卵白蛋白40μg(0.2 mg/ml卵白蛋白溶液0.2ml)；在第20、24、28、30天給予高劑量卵白蛋白30mg(15mg/ml卵白蛋白溶液2.0ml)灌胃激發(fā)；空白對(duì)照組同期分別給予同等容量的生理鹽水腹腔注射和灌胃。分別觀察兩組幼鼠體重增長(zhǎng)、外觀、活動(dòng)度及排便等變化；酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組幼鼠血清卵白蛋白特異性免疫球蛋白E含量；蘇木精-伊紅染色觀察空腸、回腸、結(jié)腸黏膜形態(tài)變化和嗜酸性粒細(xì)胞

3、浸潤(rùn)；甲苯胺藍(lán)染色觀察空腸、回腸、結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞密度及其完整性百分率進(jìn)行幼鼠食物過敏模型評(píng)價(jià)。
　　采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，α=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.兩組幼鼠體重在第0、7、14、21天差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)；在第28、30天，F(xiàn)A組、NS組幼鼠體重(g)分別為186.3±3.39、191.4±4.27和195.4±3.20、201.3±4.06，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P＜0.05)。FA組幼鼠在致敏激發(fā)后均出現(xiàn)不同程度豎毛，毛發(fā)失去光澤，活動(dòng)減少或俯臥不動(dòng)，抓耳撓腮或躁動(dòng)不安，并出現(xiàn)排不成形稀便；NS組幼鼠無明顯變化。
　　2.致敏前(D0p)、第一次激發(fā)前(D20p)、最后一次激發(fā)后(D30a)FA組幼鼠血清OVA-IgE含量(μg/ml)分別為6.19±1.05、10.34±1.28、13.17±1.43，NS組分別為6.11±1.13、6.17±1.08、6.31±1.05。隨著基礎(chǔ)

5、致敏和灌胃激發(fā)，食物過敏組血清卵白蛋白特異性IgE水平明顯升高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與空白對(duì)照組比較，在D20p、D30a食物過敏組幼鼠血清血清卵白蛋白特異性IgE含量明顯升高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；以血清血清卵白蛋白特異性IgE含量高于NS組X+3S作為致敏成功的陽性判定值所得，食物過敏組幼鼠致敏率為100％，空白對(duì)照組無一例致敏。
　　3.蘇木精-伊紅染色光鏡下觀察，食物過敏組空腸、回腸、結(jié)腸腸黏

6、膜不同程度損傷，其中，空腸黏膜損傷最明顯，腸黏膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯；其空腸、回腸、結(jié)腸每高倍視野嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)(個(gè)/HPF)分別為26.6±5.9、18.2±3.2、13.0±2.8；NS組分別為7.8±1.4、7.6±1.6、6.2±1.3，F(xiàn)A組，兩組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.甲苯胺藍(lán)染色高倍鏡下，食物過敏組空腸、回腸、結(jié)腸黏膜內(nèi)見明顯肥大細(xì)胞聚集伴脫顆粒；其空腸、回腸、結(jié)腸每高倍視野肥大細(xì)胞數(shù)(個(gè)/

7、HPF)分別為9.8±2.3、5.9±2.0、4.4±1.3，空白對(duì)照組分別為2.3±0.3、2.0±0.4、1.3±0.3，兩組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。食物過敏組空腸、回腸、結(jié)腸黏膜內(nèi)肥大細(xì)胞完整性百分率(%)分別為22.3±2.6、42.9±4.9、57.5±2.9；空白對(duì)照組分別為80.1±4.6、83.8±4.5、85.1±4.8，兩組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　采用致敏