通過免疫Ro60多肽的方法建立一種新的干燥綜合征小鼠模型.pdf

1、目的:干燥綜合征是一種自身免疫病，它影響外分泌腺而導(dǎo)致眼干和口干等癥狀。這個(gè)疾病的致病自身抗原還不清楚，所以目前還缺乏一個(gè)好的通過主動(dòng)免疫抗原而建立的動(dòng)物模型。干燥綜合征病人的一個(gè)主要特點(diǎn)是血清中存在抗SSA/Ro60自身抗體，且該自身抗體是診斷干燥綜合征標(biāo)準(zhǔn)之一。本研究旨在通過主動(dòng)免疫Ro60抗原表位多肽，建立類似人類干燥綜合征的小鼠模型并探索Ro60抗原在干燥綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:利用Titermax和CFA當(dāng)佐

2、劑，分別與Ro60_316-335，Ro60_480-494抗原表位短肽混合后腳掌或皮下免疫BALB/c小鼠，對照組用PBS與各佐劑混合后免疫。利用ELISA的方法，我們檢測血清抗Ro60多肽IgG抗體以及它的亞型還有血清中的細(xì)胞因子的表達(dá)情況。在免疫前，免疫后45天和免疫后90/120天，分別檢測各組小鼠唾液和淚液分泌量以及體重變化情況。實(shí)驗(yàn)在免疫后90/120天結(jié)束，從小鼠體內(nèi)收獲的淚腺，唾液腺和其他組織，用來做組織化學(xué)和免疫學(xué)的評

3、估。用免疫熒光的方法來鑒定組織中的炎癥細(xì)胞浸潤情況。同時(shí)，通過免疫熒光的方法來檢測組織中自身抗體的沉積情況。最后，通過轉(zhuǎn)移免疫小鼠的IgG到正常小鼠來檢驗(yàn)被免疫小鼠體內(nèi)抗體的致病性。
　　結(jié)果:Ro60_316-335短肽與Titermax佐劑免疫的BALB/c小鼠，在免疫后90天出現(xiàn)了類似干燥綜合征的癥狀。小鼠的淚液分泌量減少，淚腺組織上出現(xiàn)明顯的黑色斑點(diǎn)，病理學(xué)顯示淚腺中腺泡形態(tài)改變，腺泡萎縮并出現(xiàn)多處空腔。血清中產(chǎn)生了抗Ro

4、60_316-335短肽的自身抗體，淚腺組織中也可以觀察到有自身抗體IgG沉淀。同時(shí)，細(xì)胞因子水平發(fā)生明顯變化，其中促炎癥因子IFN-γ和IL-17的水平有明顯的提高。同時(shí)，在淚腺組織中可以觀察到T細(xì)胞，B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和中心粒細(xì)胞浸潤。與免疫Ro60_316-335短肽的小鼠不同的是:免疫Ro60_480-494多肽免疫小鼠和對照組小鼠并沒出現(xiàn)以上的癥狀。最后，如果把佐劑改變?yōu)镃FA佐劑后，Ro60_316-335多肽免疫的小鼠僅產(chǎn)生

5、抗Ro60_316-335多肽的自身抗體，但并無其它病理和功能改變。而轉(zhuǎn)移免疫小鼠的IgG到正常小鼠并不能導(dǎo)致小鼠外分泌功能降低。
　　結(jié)論:通過Ro60_316-335短肽與Titermax佐劑免疫，我們成功地建立了一個(gè)新的干燥綜合征的小鼠模型。該模型為進(jìn)一步研究干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制及診斷治療方法奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，這個(gè)模型的成功建立也證明了針對Ro60的自身免疫反應(yīng)在干燥綜合征的發(fā)病過程中起到了一定的作用。而這個(gè)作用不僅和Ro6