原發(fā)干燥綜合征小鼠模型發(fā)病前相關(guān)致病機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　原發(fā)干燥綜合征是一種累及唾液腺和淚腺從而導(dǎo)致口干和眼干的自身免疫性疾病。目前，該疾病的發(fā)病機(jī)制還不明確，尤其是該疾病在臨床癥狀出現(xiàn)之前的相關(guān)發(fā)病因素更不清楚。研究表明，和該疾病相關(guān)的抗SSA(Ro60)抗體早在患者出現(xiàn)臨床癥狀幾年之前就已出現(xiàn)，說明該抗體可能直接或間接參與到了原發(fā)干燥綜合征的早期發(fā)病機(jī)制中。最近，我們通過免疫一段Ro60多肽建立了一種新的小鼠模型。在這個(gè)模型里，小鼠首先產(chǎn)生抗SSA(Ro60)抗體，然后

2、出現(xiàn)外分泌腺腺體淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淚腺分泌功能受損，這一現(xiàn)象很好地模擬了病人的情況。在這一項(xiàng)研究里，為了研究原發(fā)干燥綜合征臨床癥狀出現(xiàn)之前的早期發(fā)病機(jī)制，我們對(duì)這種小鼠模型發(fā)病之前的早期階段進(jìn)行研究。
　　方法:
　　我們給實(shí)驗(yàn)組小鼠免疫Ro60_316-335+TiterMax，給對(duì)照組小鼠免疫PBS+TiterMax。并且收集免疫前、免疫后第2周、4周、6周和12周小鼠的血清、淚腺和腮腺腺體以作進(jìn)一步研究。為了界定疾病發(fā)病之

3、前的早期階段，我們檢測(cè)小鼠在免疫前和免疫后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的自身抗體產(chǎn)生、腺體淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和淚液分泌情況。為了了解疾病發(fā)病早期階段在淚腺中發(fā)生的生物學(xué)反應(yīng)，我們檢測(cè)小鼠發(fā)病前淚腺中的全基因組表達(dá)水平的變化。隨后，我們對(duì)可能與致病相關(guān)的基因的表達(dá)的變化在RNA水平和蛋白水平上進(jìn)行確認(rèn)。為了了解淚腺腺體中的細(xì)胞凋亡情況，我們使用TUNEL方法來檢測(cè)細(xì)胞核中可能存在的由細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的斷裂的DNA。此外，為了觀察CD4+T淋巴細(xì)胞在小鼠致病過程中的作

4、用，我們?cè)诿庖逺o60_316-335+TiterMax后給小鼠注射抗CD4單克隆抗體來敲除CD4+T淋巴細(xì)胞，觀察小鼠的疾病發(fā)展情況。
　　結(jié)果:
　　小鼠在免疫2周后開始產(chǎn)生針對(duì)Ro60_316-335的自身抗體，并且逐漸開始出現(xiàn)抗原表位擴(kuò)展;免疫4周后，小鼠淚腺中開始出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);免疫12周后，小鼠出現(xiàn)淚液分泌減少的癥狀。因此，我們將免疫后前六周定義為小鼠模型的發(fā)病早期階段?；虮磉_(dá)圖譜分析發(fā)現(xiàn):小鼠免疫Ro60

5、_316-335+TiterMax或PBS+TiterMax后兩周的淚腺細(xì)胞中的MHCⅡ基因的表達(dá)相對(duì)于免疫前要明顯升高;小鼠免疫Ro60_316-335+TiterMax后兩周的淚腺細(xì)胞的核代謝相關(guān)基因的表達(dá)比PBS+TiterMax免疫的對(duì)照組明顯降低。免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)均顯示，在小鼠淚腺組織里的腺泡細(xì)胞和導(dǎo)管細(xì)胞表面存在有MHCⅡ分子的異位表達(dá)，并且表達(dá)有MHCⅡ分子的細(xì)胞還與CD4+T淋巴細(xì)胞之間存在直接接觸。另外，細(xì)胞凋亡

6、的相關(guān)基因的表達(dá)在Ro60316-335免疫的小鼠淚腺里沒有明顯升高，而且細(xì)胞凋亡在免疫小鼠和對(duì)照小鼠的淚腺里也沒有顯著的差異。最后，小鼠在免疫Ro60316-335+TiterMax后，敲除CD4+T淋巴細(xì)胞可防止小鼠的淚液分泌的降低。
　　結(jié)論:
　　我們通過對(duì)這個(gè)新的小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，在臨床癥狀出現(xiàn)前的早期階段的淚腺中有兩個(gè)免疫相關(guān)反應(yīng)出現(xiàn)，分別是TiterMax誘導(dǎo)的MHCⅡ分子在淚腺組織細(xì)胞上的異位表達(dá)和Ro60