經(jīng)前期綜合征(重度,PMDD)肝氣逆證大鼠模型標準化及其評價方法的建立.pdf

1、目的:摸索PMDD肝氣逆證大鼠模型標準化造模方法;對制備模型進行質(zhì)量考核,探索模型評價的量化考核問題;以模型為載體考察病證及中藥白香丹膠囊對動物體內(nèi)微觀指標含量變化的影響,探討模型行為學表現(xiàn)下的中樞機制。方法:采用情志刺激為主多因素分段刺激法(Test II)制備PMDD肝氣逆證大鼠模型,同時與傳統(tǒng)的情志刺激為主多因素造模法(Test I)對比,并采用氟西汀、白香丹行藥物干預。通過比對各組大鼠在糖水偏好實驗、曠場實驗和高架十字迷宮實驗中

2、的關(guān)鍵行為學指標,實現(xiàn)PMDD肝氣逆證大鼠模型制備方法的標準化。對模型標準化后的大鼠行為學數(shù)據(jù)進行信度檢驗、效度估計,最終實現(xiàn)模型評價方法的初步量化考核。具體通過SPSS軟件計算模型評價方法的表面效度、結(jié)構(gòu)效度的因子分析參數(shù)、復測信度的組內(nèi)相關(guān)性系數(shù)、內(nèi)部一致性系數(shù)(Cronbach’s a系數(shù))進行考核。收集標準造模方法制備的各組大鼠外周血清并分離其額葉、海馬、下丘腦三個腦區(qū),分別采用高效液相色譜法檢測模型大鼠中樞不同腦區(qū)及外周血中單

3、胺類物質(zhì)(NE、5-HT、DA)、放射免疫法測定性激素及其調(diào)節(jié)激素(P、 PRL、E2)的含量。結(jié)果:(1)關(guān)鍵行為學指標評測中,Test I中造模后非接受期模型組、氟西汀組大鼠指標LA較正常組顯著升高(P＜0.01、P＜0.01),白香丹組大鼠較模型組顯著下降(P＜0.05);白香丹組大鼠較模型組SC％顯著上升(P＜0.05)。Test II中造模后非接受期模型組大鼠指標OT%、OE%、SC%較正常組顯著下降(P＜0.01、P＜0.0

4、5、P＜0.05),LA則顯著上升(P＜0.001)。給予白香丹和氟西汀干預后,大鼠OT%、OE%、OFT變化均可得到明顯糾正(P＜0.05)。(2)標準化造模后大鼠的模型評價方法信效度檢驗結(jié)果顯示:模型組大鼠宏觀表征切合肝氣逆證患者的臨床表現(xiàn),提示表面效度良好。因子分析顯示:SPT-OFT-EPM評價方法可以抽提三個公因子:OT%、OE%對焦慮因子FⅠ貢獻度大(92.6%,88.6%):LA in OFT、LA in EPM對運動因子

5、FⅡ貢獻度大(85.2%,93.9%);HD、RE、SC%對探究行為因子FⅢ貢獻度大(54.1%,86.8%,55.2%)。ICC結(jié)果顯示:SC%(ICC=0.959,P＜0.01)、LA(ICC=0.991,P＜0.01)、OT%(ICC=0.791,P＜0.01)、OE%(ICC=0.923,P＜0.01)均具有較好的復測信度。Cronbach’sα系數(shù)檢測結(jié)果顯示:焦慮維度Cronbach’sα=0.671,運動維度Cronbac

6、h’sα=0.254,探究行為維度Cronbach’sα=0.656,評價方法整體維度Cronbach’sα=0.576。(3)標準化造模后大鼠的微觀指標檢測結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組大鼠NE含量在下丘腦、額葉中顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)、外周血清中顯著降低(P＜0.05);DA含量在海馬、下丘腦、額葉中表現(xiàn)為顯著降低(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)、血清中顯著升高(P＜0.01);5-HT在海馬、下丘腦、外

7、周血清中顯著降低(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05)、額葉中顯著升高(P＜0.05)。同時血清中P與E2的含量顯著降低(P＜0.01、P＜0.01)。給藥干預后,與模型組大鼠相比,氟西汀組大鼠NE含量在額葉中顯著下降(P＜0.05)、在外周血清中顯著升高(P＜0.05);DA含量在額葉中顯著上升(P＜0.05)、在外周血清中顯著下降(P＜0.05);5-HT含量在額葉顯著下降(P＜0.01)、在外周血清中顯著上升(P＜0.05)

8、。同時血清中P與E2的含量顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)。各組大鼠PRL含量無顯著差異。與正常組相比,白香丹組大鼠NE含量在額葉、下丘腦中顯著降低(P＜0.05、P＜0.05)、在外周血清中顯著升高(P＜0.05);5-HT含量在額葉顯著降低(P＜0.05)。結(jié)論:(1)PMDD肝氣逆證大鼠模型分段刺激造模法與連續(xù)刺激造模法相比:造模原理更契合發(fā)病機制,制備方法更科學合理,所制備的動物模型行為學指標更貼近臨床證候群。(2)采用S

9、PT-OFT-EPM的模型評價方法對PMDD肝氣逆證大鼠模型進行評價,可以評測模型中焦慮、運動、探索行為因子的細微變化。該評價方法具有較高的表觀信度與內(nèi)部一致性,顯示出評價方法與模型本身契合緊密。模型制備方法的復測信度良好,提示采用分段刺激造模法制備的PMDD肝氣逆證大鼠模型具有高度的穩(wěn)定性與可重復性。(3)PMDD肝氣逆大鼠證狀呈現(xiàn)與下丘腦、額葉NE含量升高,海馬、下丘腦、額葉中DA含量下降,海馬、下丘腦、外周血清中5-HT含量降低有