SHR大鼠肥厚左室心肌microRNA表達(dá)與室性心律失常關(guān)系的研究.pdf

1、microRNA(miRNA)是內(nèi)源性非編碼蛋白質(zhì)的單鏈小RNA，它通過調(diào)控基因表達(dá)來參與生命過程中的一系列重要進(jìn)程。有研究表明miRNA可能與疾病發(fā)生有密切的關(guān)系，在不同類型疾病的發(fā)生過程中，miRNA的表達(dá)水平及其調(diào)節(jié)作用是不同的。已有研究發(fā)現(xiàn)miRNA與心肌肥厚、心律失常等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，大鼠心肌梗死后miRNA-1的表達(dá)上調(diào)抑制心肌連接蛋白43(connexin43，Cx43)和內(nèi)向整流鉀通道2.

2、1(Kir2.1)的表達(dá)而引發(fā)室性心律失常(VA)。
　　 高血壓病是常見的心血管疾病，長(zhǎng)期的血壓增高可導(dǎo)致左室肥厚(LVH)。已有臨床研究表明，高血壓病伴L(zhǎng)VH患者VA的發(fā)生率可數(shù)倍增高，甚至可發(fā)生猝死。目前有關(guān)高血壓心肌肥厚發(fā)生VA的機(jī)制尚未完全闡明。因此，為了進(jìn)一步闡明高血壓LVH者發(fā)生VA的分子機(jī)制，尋找新的VA治療靶點(diǎn)，本研究以SHR大鼠為研究對(duì)象，進(jìn)行了以下三方面的系列研究。
　　 第一部分：SHR大鼠LVH

3、與VA誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 17周齡的雄性SHR大鼠12只為L(zhǎng)VH組，8周齡的雄性SHR大鼠12只為非LVH組，17周齡的雄性WKY大鼠12只為對(duì)照組。通過Langendorff灌注大鼠的離體心臟，觀察低鉀液灌注誘發(fā)VA的情況；組織病理學(xué)染色觀察離體心臟LVH情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、HE染色結(jié)果顯示LVH組大鼠左心室心肌細(xì)胞明顯肥大，心肌間質(zhì)有不同程度增多。2、LVH組灌注低鉀液后出現(xiàn)VA時(shí)間明顯早于非LVH組和對(duì)照組(P＜0.0

4、1，P＜0.05)。3、LVH組的心律失常評(píng)分、VT發(fā)生率明顯高于非LVH組和對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 第二部分：SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA表達(dá)的研究。本部分包括二個(gè)方面的研究：1、SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA差異表達(dá)研究。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)SHR大鼠肥厚左室心肌組織miRNA-1表達(dá)。
　　 在SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA差異表達(dá)的研究中，10只16周齡雄性

5、SHR大鼠為L(zhǎng)VH組，10只8周齡雄性SHR大鼠為對(duì)照組。左室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)、組織病理學(xué)染色和測(cè)量心肌細(xì)胞橫徑(TDM)方法觀察LVH狀況；取左心室心肌組織常規(guī)抽提總RNA，應(yīng)用含有924條探針的miRNA芯片檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行miRNA表達(dá)譜差異分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、與對(duì)照組比較，LVH組和非LVH組的收縮壓和舒張壓明顯增高(P＜0.05，P＜0.01)。2、HE染色結(jié)果顯示LVH組大鼠左室心肌呈肥大表現(xiàn)，心肌間質(zhì)有不同程度增多；與對(duì)照

6、組比較，LVH組大鼠LVMI和CVF明顯增高(P＜0.05)。3、LVH組大鼠左室心肌組織miRNA表達(dá)譜中差異表達(dá)的miRNA共有13個(gè)，其中有4個(gè)miRNA上調(diào)，9個(gè)miRNA下調(diào)。
　　 在RT-PCR檢測(cè)SHR大鼠肥厚左室心肌組織miRNA-1表達(dá)的研究中，通過RT-PCR法定量檢測(cè)第二部分(研究一)大鼠心肌組織miRNA-1表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、與對(duì)照組比較，LVH組左室心肌組織miRNA-1表達(dá)水平明顯升高為對(duì)照組

7、的2.08±0.21倍。2、SHR大鼠左室心肌組織miRNA-1表達(dá)水平與LVMI、CVF均呈正相關(guān)(分別r=0.712和0.674，均P＜0.05)。
　　 第三部分：miRNA-1對(duì)心肌組織Cx43、Kir2.1的調(diào)控作用研究。分為兩方面的研究：1、SHR大鼠肥厚左室心肌組織中Cx43、Kir2.1表達(dá)及其與miRNA-1相關(guān)性研究。2、干預(yù)SHR大鼠肥厚左室心肌組織中miRNA-1的表達(dá)對(duì)Cx43、Kir2.1蛋白表達(dá)水平

8、的影響。
　　 在SHR大鼠肥厚左室心肌組織中Cx43、Kir2.1表達(dá)及其與miRNA-1相關(guān)性研究中，取第二部分兩組大鼠心肌組織，用免疫組織化學(xué)和WesternBlot檢測(cè)心肌組織中Kir2.1和Cx43蛋白表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：LVH組左室心肌組織Cx43、Kir2.1相對(duì)含量均明顯低于對(duì)照組(均P＜0.05)，并且與心肌組織miRNA-1表達(dá)水平均呈顯著負(fù)相關(guān)(均P＜0.05)。
　　 在干預(yù)SHR大鼠肥厚左室心肌組織

9、中miRNA-1的表達(dá)對(duì)Cx43、Kir2.1水平的影響研究中，選擇16只高血壓持續(xù)發(fā)展期并有LVH的17周齡SHR大鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為干預(yù)組6只，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組各5只。采用尾靜脈高壓注射脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-1抑制劑(Anti-mRNA-1)技術(shù)基因沉默miRNA-1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、與兩個(gè)對(duì)照組比較，干預(yù)組轉(zhuǎn)染Anti-miRNA-1后大鼠左室心肌組織miRNA-1表達(dá)水平明顯減少了(40±8％，P＜0.05)。2、

10、轉(zhuǎn)染Anti-miRNA-1基因沉默miRNA-1使干預(yù)組大鼠左室心肌組織Cx43、Kir2.1蛋白表達(dá)水平明顯高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(均P＜0.05)。
　　 本課題研究結(jié)果表明：1、伴有LVH的SHR大鼠心臟低鉀灌注液誘發(fā)VA幾率明顯增高，提示LVH與VA的發(fā)生密切相關(guān)。2、SHR大鼠肥厚的左室心肌組織miRNA的表達(dá)有明顯改變，提示miRNA可能參與SHR大鼠高血壓左室肥厚的發(fā)生發(fā)展。3、SHR肥厚左室大鼠心肌組織中m