大鼠視乳頭部位活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞與PGE2-EP受體亞型的關(guān)系.pdf

1、目的：探討視乳頭部位星形膠質(zhì)細(xì)胞活化后EP受體的表達(dá)特點(diǎn)及對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　方法：原代培養(yǎng)視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞：取3個(gè)月大的SD大鼠的眼球，在手術(shù)顯微鏡下分離出視乳頭，將其切成2-3塊放在含10％胎牛血清的普通培養(yǎng)基DMEM/F12中培養(yǎng)，待細(xì)胞從組織塊爬出后去掉組織塊，加入星形膠質(zhì)細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基，然后把分離純化星形膠質(zhì)細(xì)胞，傳代2次用GFAP作細(xì)胞鑒定；蛋白印跡法檢測(cè)C57小鼠、SD大鼠以及正常人視網(wǎng)膜EP受體的表達(dá)；

2、細(xì)胞免疫熒光分別檢測(cè)未加藥和加表皮生長(zhǎng)因子EGF(20ng/ml)、NMDA(50UM)刺激后的星形膠質(zhì)細(xì)胞EP受體的表達(dá)定位；采用蛋白印跡法檢測(cè)EGF(20ng/ml)、NMDA（10、50、100、200um）刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后COX-2、EP受體及GFAP的相對(duì)表達(dá)情況。
　　結(jié)果：經(jīng)過3周左右的培養(yǎng)，純化星形膠質(zhì)細(xì)胞大約95%表達(dá)GFAP。蛋白印跡結(jié)果顯示在C57小鼠、SD大鼠以及正常人視網(wǎng)膜EP2-4受體有表達(dá)；細(xì)胞免疫

3、熒光結(jié)果顯示，EP1受體表達(dá)在細(xì)胞胞膜，EP2和EP4受體在胞核表達(dá)，EP3在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，加藥刺激后受體表達(dá)定位并沒有發(fā)生改變；EGF可以使星形膠質(zhì)細(xì)胞活化使其形態(tài)發(fā)生變化，GFAP表達(dá)增加，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；EGF刺激細(xì)胞后，蛋白結(jié)果顯示，COX-2被誘導(dǎo)生成，PGE2的四個(gè)受體表達(dá)都增加，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；NMDA刺激后，EP受體只有輕微表達(dá)變化，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：EGF激活星形膠質(zhì)