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文檔簡介
1、目的:研究活化星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocyte,Ast)表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor,EGFR)的表達(dá)變化,探討EGFR對星形膠質(zhì)細(xì)胞活化所起的關(guān)鍵作用。
方法:采用振蕩培養(yǎng)法結(jié)合差速貼壁法分離純化培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞,將得到的第二代星形膠質(zhì)細(xì)胞分為對照組、活化組、抑制組:將常規(guī)用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后的星形膠質(zhì)細(xì)胞作為對照組細(xì)胞,用加入20ng/ml睫狀
2、神經(jīng)營養(yǎng)因子、10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后的星形膠質(zhì)細(xì)胞為活化組細(xì)胞,將含30μmol/L Genistein、10%FBS的DMEM培養(yǎng)基作用于活化組細(xì)胞再培養(yǎng)24h后的細(xì)胞作為抑制組細(xì)胞。通過免疫熒光化學(xué)觀察各組細(xì)胞的形態(tài)變化;應(yīng)用半定量RT-PCR方法分析各組細(xì)胞間膠原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA及EGFR mRNA表達(dá)變化。
結(jié)果:活化組與
3、對照組比較,星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量增多,胞體變大,突起增多變長,交織成網(wǎng)狀;RT-PCR示不僅GFAP mRNA表達(dá)增高,EGFR mMRA表達(dá)亦明顯增高,與對照組比較有顯著差異(P<0.01);應(yīng)用EGFR抑制劑Genistein干預(yù)后,與活化組相比,星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量不再增多,細(xì)胞胞體變小,突起減少縮短,星形膠質(zhì)細(xì)胞活化被抑制,GFAP mRNA表達(dá)下降,與活化組比較有顯著差異(P<0.01)。
結(jié)論:1.活化后的星形膠質(zhì)細(xì)胞
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