中藥腎絡(luò)通對(duì)UUO大鼠腎臟細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：觀察單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型大鼠細(xì)胞增殖標(biāo)志物增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，檢測(cè)與其調(diào)控相關(guān)的血清糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白激酶-1(SGK-1)、細(xì)胞生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的改變，探討益氣活血通絡(luò)中藥腎絡(luò)通抑制UUO大鼠腎臟細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制，為本方在臨床的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)研究選用健康清潔級(jí)雌性Wistar大鼠48只，體重200±20克，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由飲食與飲水，溫度條件控制在(22±

2、2)℃。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將48只大鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，即假手術(shù)組(Sham group)、UUO組(UUO group)、依普利酮組(EPL group)、腎絡(luò)通組(SLT group)。各組大鼠UUO造模方法如下：10％水合氯醛麻醉后，于腹部左側(cè)切開皮膚，游離出左側(cè)輸尿管，于輸尿管上1/3和中1/3處結(jié)扎離斷輸尿管并縫合。假手術(shù)組則僅游離輸尿管。術(shù)后給藥，依普利酮組給予依普利酮100mg·kg-1·d-1；中藥腎絡(luò)通組予腎絡(luò)

3、通煎劑26 g·kg-1·d-1，假手術(shù)組和UUO組則給予等容量生理鹽水。治療10d后，摘取左側(cè)腎臟稱重，縱向?qū)⒛I臟一分為二，一半腎臟置于4%多聚甲醛中固定，另一半腎臟置于-70℃冰箱保存用于提取蛋白。應(yīng)用免疫組化及 Western blot方法檢測(cè)PCNA、 SGK-1、TGF-β1的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴HE染色結(jié)果示，假手術(shù)組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)基本正常，間質(zhì)偶見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)水腫，小管上皮細(xì)胞排列整齊，無(wú)濁腫；UUO組腎間

4、質(zhì)可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，小管明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞脫落；依普利酮組和腎絡(luò)通組可見腎小管擴(kuò)張及上皮細(xì)胞脫落與UUO組基本相同，但炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較UUO組明顯減少。Masson染色結(jié)果示，假手術(shù)組大鼠腎間質(zhì)有少量膠原纖維成分表達(dá)，腎小球與腎小管基底膜結(jié)構(gòu)清晰；UUO組大鼠間質(zhì)膠原纖維成分表達(dá)明顯增多，腎臟結(jié)構(gòu)紊亂；依普利酮組和腎絡(luò)通組膠原纖維成分表達(dá)與假手術(shù)組相比明顯增多，但較UUO組則明顯減少。天狼星紅染色結(jié)果示，假手術(shù)組大鼠腎小管基底膜及腎間

5、質(zhì)可見少量膠原纖維成分表達(dá)；UUO組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)紊亂，間質(zhì)膠原纖維成分表達(dá)顯著增多；依普利酮組及腎絡(luò)通組間質(zhì)膠原纖維成分較假手術(shù)組顯著增多，與UUO組相比明顯減少。⑵檢測(cè)PCNA顯示假手術(shù)組腎小管有少量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)；UUO組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著增多，多見于腎小管上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞；依普利酮組和腎絡(luò)通組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)組增多但明顯少于UUO組。檢測(cè)SGK-1、TGF-β1表達(dá)，結(jié)果顯示假手術(shù)組SGK-1、TGF-β1呈弱表達(dá)，主要見于腎小

6、管上皮細(xì)胞，SGK-1以遠(yuǎn)端小管為主；UUO組表達(dá)明顯增強(qiáng)，主要表達(dá)于腎間質(zhì)細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞；依普利酮組及腎絡(luò)通組表達(dá)與UUO組相比均顯著減弱。⑶采用Western blot方法檢測(cè)PCNA的表達(dá)，結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，UUO組表達(dá)顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；依普利酮組及腎絡(luò)通組PCNA表達(dá)與假手術(shù)組相比均增強(qiáng)，但與UUO組相比則明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；依普利酮組與腎絡(luò)通組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＞0.05)。檢測(cè)SGK-1、TGF-β1表達(dá)，結(jié)果顯示：UUO組SGK-1、TGF-β1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與UUO組相比，依普利酮組與腎絡(luò)通組表達(dá)均顯著減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；依普利酮組與腎絡(luò)通組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：①梗阻性腎病可誘導(dǎo)醛固酮的活化，刺激腎臟細(xì)胞增殖，參與腎間質(zhì)纖維化的形成。②依普利酮可通過(guò)阻斷醛固酮的活化作用，減輕梗阻性腎病中