雷公藤多苷對UUO大鼠腎組織Chemerin、TGF-β1及ColⅢ的影響.pdf

1、目的：
　　腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）是各類慢性腎臟疾病進(jìn)展變成終末期腎臟病共同的病變過程，它的病理特征主要表現(xiàn)為正常腎間質(zhì)和腎小管的結(jié)構(gòu)被大量堆積的細(xì)胞外基質(zhì)（extra cellular matrixc，ECM）所取代，如Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原、層黏連蛋白等，導(dǎo)致腎小管間質(zhì)纖維化和腎小球硬化，最終導(dǎo)致腎功能喪失，是一個由炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、多種細(xì)胞因子和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活等共同配合

2、參與的復(fù)雜過程。Chemerin是近些年來新確定的一種脂肪細(xì)胞因子，它具有類似炎癥因子的趨化作用，能夠通過NF-κB、JAK/STAT、TGF-β1多種信號通路參與炎癥反應(yīng)，并且與糖尿病腎病、腫瘤和冠狀動脈粥樣硬化等多種疾病相關(guān)。在腎臟疾病領(lǐng)域的研究中，發(fā)現(xiàn)Chemerin作為炎癥因子參與了糖尿病腎病和慢性腎功能不全，且其表達(dá)水平與轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1，結(jié)締組織生長因子CTGF，腫瘤壞死因子TNF-α等呈正相關(guān)，可以預(yù)測腎功能損害。

3、TGF-β1作為一個公認(rèn)的重要炎癥因子，它能夠刺激細(xì)胞外基質(zhì)積聚并損害腎功能；而且已有研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1因子和它下游的Ⅲ型膠原，在經(jīng)典的單側(cè)輸尿管梗阻（Unilateral ureteral occlusion，UUO）致腎間質(zhì)纖維化動物模型中發(fā)揮重要作用。然而國內(nèi)外以往關(guān)于chemerin與腎間質(zhì)纖維化關(guān)系的研究，大多都是應(yīng)用糖尿病腎病模型，較少應(yīng)用單側(cè)輸尿管梗阻模型研究。雷公藤多苷具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及抗癌等作用，目前廣泛應(yīng)用在治療

4、腎病及其他自身免疫系統(tǒng)疾病。本實驗?zāi)康氖窃赟D大鼠UUO模型中，觀察腎組織Chemerin、TGF-β、Ⅲ型膠原的表達(dá)情況，和其在腎間質(zhì)纖維化中的作用，以及應(yīng)用雷公藤多苷后對其表達(dá)情況的影響，為腎間質(zhì)纖維化的防治提供新的實驗基礎(chǔ)及治療靶點。
　　方法：
　　清潔級健康雄性SD大鼠72只，體重（200±20）克，經(jīng)1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機分為A、B、C、D4組：假手術(shù)組（分離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎）、UUO組（結(jié)扎左側(cè)輸尿管近腎盂段

5、）、UUO低劑量雷公藤多苷干預(yù)組及UUO高劑量雷公藤多苷干預(yù)組。自造模當(dāng)日起，C組給予雷公藤多苷（10mg/kg/d）灌胃，D組給予雷公藤多苷（20mg/kg/d）灌胃，余下兩組給等體積的生理鹽水灌胃。實驗時期動物可正常飲食飲水，每天密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，飲食和活動是否有異常，按照大鼠體重調(diào)整給藥劑量。術(shù)后第3、7、14天在每組大鼠中分別隨機抽取6只處死，留腎組織行相關(guān)檢查。用0.9％鹽水充分清洗組織后分為兩部分，一部分放進(jìn)10%中性

6、福爾馬林溶液固定，病理切片后用于做HE、Masson染色及免疫組化，評估各組不同時刻腎間質(zhì)病變的水平；另一部分腎組織放進(jìn)液氮立刻冷凍后轉(zhuǎn)存至-80℃冰箱，待測Western blot。所測得數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件統(tǒng)計后進(jìn)行分析，認(rèn)為P＜0.05差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1腎臟組織病理形態(tài)改變
　　1.1肉眼觀察：剖解后肉眼可見A組腎臟顏色及大小正常。B、C、D三組左側(cè)腎臟隨梗阻時間延長體積逐漸增大，腎皮

7、質(zhì)逐漸變薄，其中B組腎臟增大最為明顯，C、D兩組均較其減輕。
　　1.2 HE及Masson染色
　　A組腎臟結(jié)構(gòu)正常，腎小管及腎間質(zhì)無明顯病理改變。B組：腎臟構(gòu)造受到破壞，術(shù)后第3天觀察部分腎小管上皮細(xì)胞脫落，腎小管擴(kuò)張，局部炎性細(xì)胞浸潤，腎間質(zhì)少量膠原纖維沉積著色。第7天時腎小管明顯擴(kuò)張且數(shù)目增長，腎間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤，間質(zhì)寬度增加，出現(xiàn)纖維化改變，增寬的間質(zhì)區(qū)域膠原纖維著色增多。第14天腎小管結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，腎間質(zhì)纖維

8、化程度加重，膠原纖維沉積著色更加明顯。同時期病變程度最嚴(yán)重的是B組，C、D組病變水平均減輕，但仍然重于A組，且D組病變水平較C組減輕明顯。
　　2免疫組化
　　2.1 Chemerin：A組腎小管上皮細(xì)胞中Chemerin少量散在表達(dá)。B組腎小管上皮細(xì)胞中的陽性表達(dá)明顯增多，以胞漿表達(dá)最為明顯。且隨著梗阻時間的延長，Chemerin的陽性表達(dá)逐漸增多，與相同時期的A組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。與同一時期B組相比較，C

9、、D兩組，Chemerin的陽性表達(dá)均有明顯下降，且D組較C組下降更加明顯（P<0.05），但其陽性表達(dá)水平仍高于同一時期的A組水平（P<0.05）。
　　2.2 TGF-β1：A組腎小管上皮細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá)很少。B組腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)中陽性表達(dá)明顯增多，且隨著梗阻病變時間的延長表達(dá)量持續(xù)增多。與相同時期的A組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；與同一時期B組相比較，C、D兩組，TGF-β1的陽性表達(dá)均有明顯下降，且D組

10、較C組下降更加明顯（P<0.05），但其陽性表達(dá)水平仍高于同一時期的A組水平（P<0.05）。
　　2.3Ⅲ型膠原蛋白：A組腎小管上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞中可見散在少量表達(dá)。B組腎小管上皮細(xì)胞中陽性表達(dá)明顯增加，且隨著梗阻病變時間的延長表達(dá)量持續(xù)增加。與相同時期的A組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；與同一時期B組相比較，C、D兩組，Ⅲ型膠原的陽性表達(dá)均有明顯下降，且D組較C組下降更加明顯（P<0.05），但其陽性表達(dá)水平仍高于同一時期

11、的A組水平（P<0.05）。
　　3 Western Blot結(jié)果：從圖片及圖像分析結(jié)果可以看出，與同期A組相比，第3、7、14天B組腎組織中Chemerin蛋白的表達(dá)量均明顯增加（P<0.05）；與同一時期B組相比較，C、D兩組，蛋白表達(dá)量均有明顯下降，且D組較C組下降更加明顯（P<0.05），但其陽性表達(dá)水平仍高于同一時期的A組水平（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1脂肪因子Chemerin參與UUO致腎間質(zhì)纖維