自噬性心肌保護中基于Notch1信號相關miRNA和lncRNA的篩選.pdf

1、急性心肌梗塞在心血管疾病中發(fā)病率和死亡率極高，缺血/再灌注損傷仍是急性心肌梗塞臨床治療中面臨的難題。如何減輕缺血/再灌注損傷是心肌損傷與保護的研究熱點。研究心肌損傷發(fā)生機制，將有助于為臨床防治心肌缺血損傷提供理論和實踐依據(jù)。因此，基于 lncRNA-miRNA-Notch1調(diào)控假說，建立心肌細胞缺氧/復氧損傷及自噬保護模型，通過高通量測序技術及生物信息學比較分析，篩選出在自噬保護中具有調(diào)控 Notch1蛋白作用的 miRNA，以及具有調(diào)

2、控該 miRNA的 lncRNA，為研究 Notch1信號通路在自噬性心肌保護的分子機制提供科學依據(jù)。
　　第1章Notch1信號通路增強自噬對抗心肌缺氧復氧損傷的保護作用
　　目的：篩選有效調(diào)控自噬的3-MA及RAPA試劑濃度，以及探討Notch1信號通路在自噬對抗心肌缺氧復氧損傷中的作用。
　　方法：建立心肌細胞損傷模型，給予3-MA、RAPA干預，檢測細胞活力，篩選3-MA及RAPA有效試劑濃度；利用Ad-N1I

3、CD及Ad-N1ICD-shRNA干預Notch1信號通路，檢測H/R損傷中心肌細胞活力情況。
　　結(jié)果：本研究中3-MA和 RAPA最佳試劑濃度分別為1μM和50nM；Notch1過表達可提高 H/R的心肌細胞活力，干擾 Notch1可明顯降低H/R心肌細胞活力；3-MA加入Notch1過表達組中，H/R的心肌細胞活力再次降低，RAPA加入 Notch1干擾組中，H/R的心肌細胞活力恢復。
　　結(jié)論：Notch1信號通路可

4、增強自噬對抗心肌缺氧復氧損傷發(fā)揮保護作用。
　　第2章高通量測序及生物信息學篩選自噬性心肌保護中Notch1信號通路相關miRNA及l(fā)ncRNA
　　目的：借助高通量測序及生物信息學比較分析篩選在自噬性心肌保護中具有調(diào)控Notch1信號通路的關鍵miRNA及l(fā)ncRNA。
　　方法：提取心肌缺氧/復氧損傷中的總 RNA，借助高通量測序及生物信息學分析系統(tǒng)，篩選具有差異表達的miRNA及l(fā)ncRNA。
　　結(jié)果：篩

5、選出了可能調(diào)控 Notch1基因表達的 miR-702-5p、miR-344g、miR-323-5p、miR-6334、miR-5132-5p、miR-15b-5p、miR-3562；生物信息學分析發(fā)現(xiàn) lncRNA-4321可與 miR-702-5p直接結(jié)合并影響其活性；在 RAPA和3-MA處理心肌細胞中，Realtime-PCR檢測顯示 lncRNA-4321表達量與心肌自噬成正比，miR-702-5p表達量與心肌自噬成反比。