Notch1信號(hào)通路在海馬硬化-內(nèi)側(cè)顳葉癲癇形成中的作用.pdf

1、癲癇是腦部神經(jīng)元超同步化放電所導(dǎo)致的一組異質(zhì)性疾病。內(nèi)側(cè)顳葉癲癇(mesial temporal lobe epilepsy，MTLE)是最常見(jiàn)的癲癇綜合征之一，也是最常見(jiàn)的成年人藥物難治性癲癇。海馬硬化(hippocampal sclerosis，HS)是MTLE常見(jiàn)的病理表現(xiàn)，以海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、神經(jīng)元丟失、顆粒細(xì)胞散布和苔狀纖維發(fā)芽為特征，但目前海馬硬化的形成過(guò)程及MTLE發(fā)病的分子機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)Notch1

2、信號(hào)通路對(duì)許多海馬硬化中出現(xiàn)的或與之類似的病理表現(xiàn)有促進(jìn)功能；在包括癲癇持續(xù)狀態(tài)在內(nèi)的損傷后神經(jīng)再生過(guò)程中發(fā)揮作用，并能在神經(jīng)元興奮性增加時(shí)表達(dá)上調(diào)；在動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)，Notchl信號(hào)關(guān)鍵分子NICDl表達(dá)量在MTLE形成過(guò)程中上調(diào)，且MTLE患者手術(shù)切除的硬化海馬中NICD1表達(dá)水平也存在上調(diào)。因此，選擇Notch1信號(hào)通路研究其在海馬硬化和MTLE發(fā)生中的作用，對(duì)理解疾病的發(fā)生過(guò)程具有重要意義。
　　 目的：
　　

3、探討Notch1信號(hào)通路的表達(dá)上調(diào)與HS-MTLE的形成是否有關(guān)；Notch1信號(hào)通路的激活是否推動(dòng)了慢性期的自發(fā)癲癇發(fā)作。
　　 方法：
　　 1．在C57BL/6小鼠右側(cè)海馬內(nèi)植入電極-加藥裝置，同側(cè)海馬內(nèi)注射Jagged1激活Notch1信號(hào)通路（對(duì)照組BSA）或DAPT（對(duì)照組DMSO）抑制該通路后，海馬內(nèi)注射7ng海人酸構(gòu)建HS-MTLE急性期模型，通過(guò)錄像腦電圖（video-electroencephalog

4、ram，vEEG）監(jiān)測(cè)觀察激活或抑制Notchl信號(hào)通路對(duì)急性期發(fā)作時(shí)間、次數(shù)和起始時(shí)間的影響。另一組小鼠右側(cè)海馬內(nèi)注射200ng海人酸構(gòu)建慢性期模型，右側(cè)海馬內(nèi)植入電極一加藥裝置，通過(guò)vEEG監(jiān)測(cè)確定穩(wěn)定的發(fā)作基線后，右側(cè)海馬內(nèi)注射Jagged1，觀察激活Notch1信號(hào)通路對(duì)慢性期發(fā)作時(shí)間的影響；洗脫期過(guò)后右側(cè)海馬內(nèi)注射DAPT+Jagged1，觀察取消激活后慢性期的發(fā)作時(shí)間。
　　 2．以免疫熒光方法檢測(cè)200ng海人酸模

5、型5w時(shí)海馬Notch1分子的分布。
　　 結(jié)果：
　　 1．正常小鼠EEG表現(xiàn)為5～7Hzθ波；慢性期及急性期海人酸模型均出現(xiàn)高幅尖波、陣發(fā)性海馬放電，及擴(kuò)散至大腦皮層的發(fā)作；此外，急性期模型還出現(xiàn)陣發(fā)性棘慢波或多棘慢波綜合、逐漸進(jìn)展的高幅棘波及癲癇持續(xù)狀態(tài)。
　　 2．慢性期注射Jagged1后發(fā)作時(shí)間顯著減少(n=5，p=0.00014)，統(tǒng)計(jì)方法為重復(fù)ANOVA法繼之Dunnet檢驗(yàn)。注射DAPT+Jag

6、ged1后，發(fā)作時(shí)間無(wú)明顯減少(n=2)。
　　 3．急性期注射Jagged1后，發(fā)作時(shí)間(p=0.0048)、發(fā)作次數(shù)(p=0.019)較對(duì)照組顯著增加（n=6或10）；注射DAPT后，發(fā)作時(shí)間(p=0.009)和發(fā)作次數(shù)(p=0.0111)較對(duì)照組顯著減少(n=7)。統(tǒng)計(jì)方法為Mann-Whitney檢驗(yàn)。
　　 4.200ng海人酸模型小鼠海馬中，與對(duì)照組相比5w時(shí)主要分布在齒狀回中，且表達(dá)量明顯上調(diào)。