EphA-EphrinA在癲癇小鼠海馬的時(shí)空表達(dá)對(duì)顳葉癲癇形成的影響.pdf

1、目的：癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)慢性疾病。有研究表明，反復(fù)癇性發(fā)作或癲癇持續(xù)狀態(tài)可導(dǎo)致腦組織尤其是海馬結(jié)構(gòu)等易損區(qū)的損傷，而腦損害性病變又可引起癇性發(fā)作，兩者互為因果，互相轉(zhuǎn)化。致癇成年小鼠與海馬損傷的關(guān)系已研究的較為廣泛和深入，其病理生理特征為軸突出芽、突觸重建。而軸突導(dǎo)向因子Eph/Ephrin與慢性癲癇形成之間的關(guān)系還不明確。本文旨在探討它們?cè)陲D葉癲癇軸突發(fā)芽、軸突重建及突觸可塑性的作用，為進(jìn)一步研究顳葉癲癇的發(fā)病機(jī)制和臨床治療提供

2、理論依據(jù)。 方法：本實(shí)驗(yàn)通過制備匹羅卡品癲癇持續(xù)狀態(tài)小鼠模型，采用RT-PCR、原位雜交、免疫熒光組織化學(xué)方法觀察EphA/EphrinA mRNA及蛋白在慢性癲癇小鼠海馬各區(qū)中的動(dòng)態(tài)表達(dá)，并應(yīng)用Neo—Timm染色法進(jìn)行苔蘚纖維發(fā)芽(mossy fiber sprouting，MFS)的觀察。 結(jié)果： 1、RT-PCR：與對(duì)照組相比，致癇后EphA/EphrinA mRNA各亞型在海馬中的表達(dá)都發(fā)生上調(diào)，并在致

3、癇后7天時(shí)達(dá)到高峰，其中以EphA4(p＜0.01)，EphA8(p＜0.05)，EphA10([p＜0.05)，EphrinA2(p‘＜0.05)，EphrinA3(p＜0.01)和EphrinA4(p＜0.05)最為明顯。 2、原位雜交方法：與對(duì)照組相比，致癇后EphrinA4 mRNA在海馬的CA3，CA1區(qū)表達(dá)均上調(diào)，其中在CA3區(qū)的表達(dá)，7天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.05)；在CA1區(qū)的表達(dá)14天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.05)；

4、在DG區(qū)的表達(dá)，沒有顯著性差異。致癇后EphA10 mRNA在CA3區(qū)7天時(shí)開始有顯著增加(P＜0.05)，在14天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.01)；在CA1區(qū)7天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.01)，在14天時(shí)仍高于對(duì)照(P＜0.05)；在DG區(qū)，14天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.05)。 3、免疫熒光組織化學(xué)：EphA10蛋白從致癇后3天開始，在海馬各區(qū)的表達(dá)都有增加，在CA1、CA3區(qū)14天時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.01)，21天時(shí)恢復(fù)至正常水平；在齒

5、狀回表達(dá)則無顯著性差異。 4、Neo—Timm染色：致癇后和對(duì)照組小鼠海馬齒狀回均未觀察到苔蘚纖維出芽的情況；在CA3區(qū)從致癇后7天開始，苔蘚纖維向始層開始投射出芽，可見有少量銀染顆粒，隨著時(shí)間推移，出芽從門區(qū)方向向CA3區(qū)方向增加，至28天時(shí)可見CA3a、b亞區(qū)有條帶狀顆粒，c亞區(qū)有大量顆粒存在。 結(jié)論： 1、半定量RT-PCR顯示EphA/EphrinA mRNA各亞型在致癇小鼠海馬的表達(dá)變化，提示這些分子的