VEGF基因組織工程聯合ERK通路干預減輕硬膜外瘢痕形成的研究.pdf

1、目的:
　　 體外轉染人血管內皮生長因子165(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF165)基因于大鼠骨髓間充質干細胞并與自體脂肪顆粒混合回植入大鼠腰椎椎板切除術后缺損區(qū)、同時腹腔注射ERK信號通路抑制劑，通過對實驗動物標本的形態(tài)學、組織學及分子生物學等指標的檢測，觀察其自體脂肪移植的存活率、VEGF與ERK信號通路之間的相關性，以預防椎板切除術后硬膜外瘢痕形成及粘連。
　　 方法:<

2、br>　　 (1)體外慢病毒轉染VEGF165基因于大鼠骨髓間充質干細胞，傳代、純化、培養(yǎng)，待細胞狀態(tài)良好，準備混合種子細胞植入大鼠體內。
　　 (2)將56只SD大鼠隨機分成4組:A組為含有VEGF165干細胞-脂肪顆粒和透明質酸鈉凝膠復合物植入組;B組為含有干細胞-脂肪顆粒和透明質酸鈉凝膠復合物植入組;C組為脂肪細胞顆粒和透明質酸鈉凝膠復合物植入組;D組為空白對照組。A組與D組里隨機分成2小組:ERK干預組和未干預組。

3、r>　　 (3)大鼠麻醉后，術區(qū)定位、消毒，背部正中縱行切開，向下鈍性分離，充分暴露，切除L1～L3棘突及椎板，造成椎板缺損模型，分別植入A、B、C、D各組復合物。術后觀察一天，術后第二天開始ERK干預組腹腔注射ERK抑制劑U0126(0.1mg/kg)，未干預組等量腹腔注射DMSO，每天1次。
　　 (4)術后4、8、12周分別處死大鼠并制作標本。大體觀察按改良Rydell-Balazs標準進行粘連程度評分;組織學HE染色觀

4、察脂肪移植存活和硬膜外瘢痕形成情況，按改良Nussbaum標準進行評分;免疫組化檢測P-ERK1/2表達;WesternBlot檢測VEGF在體內表達量，統(tǒng)計學分析。
　　 結果:
　　 ①大體觀察:A組瘢痕粘連最輕，可見較多脂肪組織，B、C組其次，D組瘢痕粘連嚴重;
　　 ②HE染色觀察:A組4周、8周、12周硬膜外可見較多存活脂肪顆粒，瘢痕粘連輕，D組4周時已形成較多致密瘢痕粘連，8周時最嚴重，12周時仍有瘢

5、痕粘連，B組與C組介于A、D兩組之間;
　　 ③免疫組化:ERK干預組與未干預組比較P-ERK表達明顯減少(P＜0.01)，A組聯合未干預組與D組聯合未干預組比較P-ERK表達少，有差異(P＜0.05);
　　 ④12周時WesternBlot檢測VEGF蛋白表達A組明顯高于其它組。
　　 結論:
　　 VEGF165基因轉染大鼠骨髓間充質干細胞混合自體脂肪顆粒移植體內能有效提高脂肪移植存活率，在硬膜外形