ERK蛋白活化在增生性瘢痕形成中的作用研究.pdf

1、目的：
　　1、第一部分：觀察瘢痕形成的動(dòng)態(tài)變化，探討增生性瘢痕組織形成過程中p-ERK分布特征。
　　2、第二部分：使用不同濃度PD98059抑制劑后，觀察瘢痕組織中p-ERK、細(xì)胞因子的變化以及細(xì)胞增殖與凋亡的情況，探討p-ERK對(duì)增生性瘢痕的影響，以及PD98059的抑制作用是否存在濃度相關(guān)性。
　　方法：
　　1、第一部分，p-ERK表達(dá)與瘢痕增生時(shí)間節(jié)點(diǎn)關(guān)系：以新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，在新西蘭大白兔耳腹

2、側(cè)切除直徑為1cm圓形皮膚及軟骨膜，建立增生性瘢痕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；取正常皮膚及造模后7天、14天、21天、28天、35天、42天瘢痕標(biāo)本，Western Blot檢測(cè)組織中t-ERK及p-ERK表達(dá)情況，以及觀察記錄瘢痕的外觀變化。
　　2、第二部分，不同濃度PD98059對(duì)瘢痕的作用：將實(shí)驗(yàn)兔分成5組，3只/組，模型組，對(duì)照組（DMSO+PBS組）及實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組又分為低濃度組（20μmol/L）組、中濃度組（30μmol/L）組

3、、高濃度組（50μmol/L）組。于造模后7天揭痂，按實(shí)驗(yàn)分組沿兔耳根部皮下注射，每耳1ml，1次/天，共計(jì)20天。于28天取標(biāo)本，HE染色觀察瘢痕組織變化、Masson染色觀察膠原沉積情況；Western Blot檢測(cè)t-ERK及p-ERK的表達(dá)情況；RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax，TGF-β1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、實(shí)驗(yàn)中p-ERK在兔耳瘢痕形成第28天表達(dá)最高，與瘢痕增生情況一致。隨著瘢痕縮小，變硬，其表達(dá)也

4、相應(yīng)降低。
　　2、在增生性瘢痕形成第28天，大體觀察兔耳瘢痕，實(shí)驗(yàn)組瘢痕較模型組及對(duì)照組瘢痕小，質(zhì)地硬；HE染色結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞、炎細(xì)胞均較模型組及對(duì)照組減少；Masson染色可見模型組及對(duì)照組膠原沉積多、膠原粗大，排列紊亂，實(shí)驗(yàn)組中膠原密度降低，間隙增寬，排列較整齊；Western Blot結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組較模型組及對(duì)照組 p-ERK表達(dá)下降（P＜0.05）；RT-PCR結(jié)果示：模型組與對(duì)照組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）

5、，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組TGF-β1、Bcl-2的表達(dá)均較模型組及對(duì)照組降低，Bax表達(dá)升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還提示PD98059對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞、膠原、p-ERK、TGF-β1及Bcl-2的抑制作用可能是呈現(xiàn)濃度相關(guān)性的，實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，濃度越高，抑制作用越明顯。
　　結(jié)論：
　　1、在兔耳增生性瘢痕形成過程中，p-ERK的表達(dá)先增后減，在第28天表達(dá)最高。這與實(shí)驗(yàn)觀察瘢痕外觀表現(xiàn)是一致的，這提示了p-ERK