轉(zhuǎn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因在增生性瘢痕中的作用.pdf

1、研究背景 瘢痕，尤其是病理性瘢痕(增生性瘢痕和瘢痕疙瘩)，由于其給患者的身體和精神帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p害，因此也是整形燒傷領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。迄今為止，雖然有多種治療方法，但是缺乏一種普遍而確定有效的方法。 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)作為最早被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)肽之一，除了在神經(jīng)系統(tǒng)各種疾病和修復(fù)再生的重要作用，在各種炎性疾病中的作用正引起人們的關(guān)注。而其在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面的作用亦受到肯定。瘢痕的形成與創(chuàng)面

2、愈合序貫發(fā)生，密不可分。雖然有較多的實(shí)驗(yàn)證實(shí)瘢痕中存在包括NGF在內(nèi)的多種神經(jīng)肽，但是在瘢痕形成和消退過(guò)程中，對(duì)NGF所扮演的角色和參與的過(guò)程少有較深刻和一致的研究。 基因治療是近年來(lái)在醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域迅猛發(fā)展的治療手段。隨著大量基因工程技術(shù)的深入研究，瘢痕的基因治療正成為整形燒傷界研究的熱點(diǎn)。這也是從根本上治愈瘢痕的有效途徑。 研究方法 在鑒定、擴(kuò)增已知重組質(zhì)粒pcDNA4／HisMax-NGF的基礎(chǔ)上，通過(guò)脂質(zhì)體

3、介導(dǎo)將重組質(zhì)粒pcDNA4／HisMax-NGF轉(zhuǎn)染至人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞和兔耳增生性瘢痕中。在成纖維細(xì)胞中應(yīng)用MTT法、免疫組化、原位雜交和實(shí)時(shí)熒光定量PCR，在兔耳增生性瘢痕中應(yīng)用測(cè)量肥大指數(shù)、HE染色、苦味酸．天狼星紅染色、免疫組化和實(shí)時(shí)熒光定量PCR，觀察重組質(zhì)粒pcDNA4/HisMax-NGF對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和兔耳增生性瘢痕的影響，以及其轉(zhuǎn)染和表達(dá)的情況。 研究結(jié)果 脂質(zhì)體介導(dǎo)的pcDNA4/HisMax-

4、NGF重組質(zhì)粒在人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染率為11.7[％]，最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間為轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，能夠引起細(xì)胞增殖活性的降低，免疫組化和原位雜交均證實(shí)基因轉(zhuǎn)染成功并能夠表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR證明轉(zhuǎn)染后NGF mRNA含量明顯增高。脂質(zhì)體介導(dǎo)的pcDNA4/HisMax-NGF重組質(zhì)粒能夠使兔耳增生性瘢痕的肥大指數(shù)降低，HE染色和苦味酸．天狼星紅染色均證實(shí)其膠原纖維減少，免疫組化證實(shí)轉(zhuǎn)染后NGF表達(dá)增加，實(shí)時(shí)熒光定量PCR證明轉(zhuǎn)染后NGF