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1、具有特定化學(xué)組成和物理形貌的HA/β-TCP陶瓷因具有良好的骨誘導(dǎo)活性,常被用作體內(nèi)骨組織工程的支架材料。在組織形態(tài)學(xué)水平,HA/β-TCP陶瓷誘導(dǎo)形成的體內(nèi)組織工程骨與自然再生骨相似,但有關(guān)體內(nèi)組織工程骨在基因表達(dá)水平的研究甚少。理想的體內(nèi)組織工程骨應(yīng)該與自然再生骨具有類似的時(shí)序性基因表達(dá)。I型膠原、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白及骨形態(tài)發(fā)生蛋白4是重要的骨相關(guān)基因,它們的正確表達(dá)對(duì)新骨形成非常重要。本研究對(duì)HA/β-TCP陶瓷構(gòu)建的體內(nèi)組織工
2、程骨中的骨相關(guān)基因-I型膠原、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白及骨形態(tài)發(fā)生蛋白4進(jìn)行mRNA或蛋白水平的定量分析,并與自然再生骨比較,從基因和蛋白水平評(píng)價(jià)體內(nèi)組織工程骨,為其應(yīng)用提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)分二部分。 第一部分:體內(nèi)組織工程骨和自然再生骨模型的構(gòu)建。制備①5mm×8mm的磷酸鈣陶瓷36粒并分別植入6只狗的豎直肌內(nèi),同時(shí),在狗的下頜骨部位形成自然再生骨模型。術(shù)后1、2、4、8、12及24周,取出體內(nèi)組織工程骨及自然再
3、生骨,大體觀察。 第二部分:體內(nèi)組織工程骨骨相關(guān)基因mRNA和蛋白水平的檢測(cè)。在各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),取3粒由磷酸鈣陶瓷構(gòu)建的體內(nèi)組織工程骨及一半自然再生骨,提取總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后,用實(shí)時(shí)相對(duì)定量PCR的方法檢測(cè)I型膠原、堿性磷酸酶和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 mRNA的表達(dá)。取兩種骨組織在1、2、4、8及24周的剩余標(biāo)本,用考馬斯亮蘭微板法對(duì)標(biāo)本中的微量蛋白定量(mg/ml),再分別采用IFCC推薦法和ELISA測(cè)堿性磷酸酶活力(U
4、/ml)及骨鈣蛋白含量(nmol/ml),并分別換算成U/mg及nmol/mg。 結(jié)果表明: (1)工型膠原、堿性磷酸酶和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 mRNA及堿性磷酸酶活力和骨鈣蛋白在體內(nèi)組織工程骨和自然再生骨中都持續(xù)表達(dá)。其表達(dá)程度不同,但表達(dá)趨勢(shì)相似。 (2)mRNA水平,工型膠原和堿性磷酸酶在體內(nèi)組織工程骨中表達(dá)峰值時(shí)間較自然再生骨的出現(xiàn)晚,且表達(dá)量少;而骨形態(tài)發(fā)生蛋白4在體內(nèi)組織工程骨中的表達(dá)一直維持在比自然再生
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