綠茶提取物對瑞舒伐他汀藥代動力學(xué)的影響及機制研究.pdf

1、目的：通過大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)的研究考察綠茶提取物對瑞舒伐他汀的影響，探討綠茶對瑞舒伐他汀的作用機制，以期為臨床綠茶與瑞舒伐他汀的合理服用提供依據(jù)。
　　方法：⑴綠茶提取物在大鼠體內(nèi)對瑞舒伐他汀藥代動力學(xué)的影響：將雄性SD大鼠分為五組：瑞舒伐他汀對照組（1 mg·kg-1）、綠茶提取物對照組（200 mg·kg-1）、瑞舒伐他?。? mg·kg-1）分別與三組不同劑量綠茶提取物（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、500

2、 mg·kg-1）合用組。每組6只大鼠進(jìn)行血漿藥代動力學(xué)實驗，灌胃給藥，給藥前后各時間點采集血樣。使用UPLC-MS/MS法測定血漿瑞舒伐他汀及表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）的濃度，WinNonlin軟件的非房室模型計算血漿藥動學(xué)參數(shù)，GraphPad軟件對藥代參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。⑵綠茶提取物和兒茶素在Caco-2細(xì)胞模型中對瑞舒伐他汀攝取和轉(zhuǎn)運過程中的影響：建立 Caco-2單層細(xì)胞模型，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、測定跨膜電阻

3、值（TEER）、監(jiān)測模型兩側(cè)堿性磷酸酶的分化及考察熒光黃的滲透率等方法確證模型的建立。采用UPLC-MS/MS法測定細(xì)胞內(nèi)和轉(zhuǎn)運后HBSS溶液中瑞舒伐他汀的濃度，在 Caco-2細(xì)胞模型中考察綠茶提取物以及四種兒茶素對瑞舒伐他汀攝取及轉(zhuǎn)運的影響。⑶綠茶提取物和兒茶素在OATP1B1-HEK293T細(xì)胞中對瑞舒伐他汀攝取過程中的影響：以攜帶增強綠色熒光蛋白（EnhancedGreenFluorescent Protein）的GV144真核

4、表達(dá)載體系統(tǒng)作為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的媒介，構(gòu)建OATPIBl-EGFP融合基因表達(dá)載體。通過觀察熒光、Western blot檢測EGFP蛋白以及陽性底物攝取實驗驗證轉(zhuǎn)染活性的表達(dá)，建立瞬時表達(dá)轉(zhuǎn)運體OATPB1的HEK293T細(xì)胞模型。采用UPLC-MS/MS法測定細(xì)胞內(nèi)瑞舒伐他汀的濃度，在OATPB1-HEK293T細(xì)胞模型中考察綠茶提取物以及四種兒茶素對OATP1B1介導(dǎo)的瑞舒伐他汀轉(zhuǎn)運的影響。⑷表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）在大鼠體

5、內(nèi)對瑞舒伐他汀藥代動力學(xué)的影響：以EGCG占綠茶提取物2.4％的比例，計算200 mg·kg-1綠茶提取物的給藥量相當(dāng)于EGCG的給藥量為4.8 mg·kg-1，對大鼠（N=6）灌胃給藥EGCG（4.8 mg·kg-1）和瑞舒伐他?。? mg·kg-1）進(jìn)行血漿藥代動力學(xué)實驗，使用UPLC-MS/MS法測定血漿瑞舒伐他汀及EGCG的濃度，WinNonlin軟件的非房室模型計算血漿藥動學(xué)參數(shù)，GraphPad軟件對藥代參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

6、
　　結(jié)果：①綠茶提取物對大鼠體內(nèi)瑞舒伐他汀的藥代動力學(xué)的影響：三種不同劑量（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、500 mg·kg-1）綠茶提取物與瑞舒伐他汀合用后，瑞舒伐他汀的AUC0-∞分別增加了58.45%±53.04%、85.77%±48.12%和129.69%±69.48%，Cmax分別增加了73.96%±57.32%、192.23%±123.56%和152.28%±220.17%，清除率無統(tǒng)計學(xué)差異（p>

7、0.05）。而綠茶提取物與瑞舒伐他汀合用后EGCG的藥代動力學(xué)參數(shù)與綠茶提取物單用對照組相比沒有發(fā)生顯著變化（p>0.05）。②綠茶提取物對Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運瑞舒伐他汀的影響：綠茶提取物使瑞舒伐他汀的攝取量（0.6289±0.0748 vs0.3245±0.0542 nmol·mg-1蛋白）和轉(zhuǎn)運（4.3651±1.2410 x10-7vs2.0679±0.4370 x10-7cm·s-1）增加，兒茶素EC、EGC和ECG對其攝取和轉(zhuǎn)

8、運無影響，而 EGCG減少了瑞舒伐他汀的攝?。?.2511±0.0328 vs0.3245±0.0542 nmol·mg-1蛋白）和轉(zhuǎn)運（1.1540±0.0762 x10-7 vs2.0679±0.4370 x10-7 cm·s-1）。③綠茶提取物和兒茶素對OATP1B1介導(dǎo)瑞舒伐他汀轉(zhuǎn)運的影響：瑞舒伐他汀在轉(zhuǎn)染后的HEK293T細(xì)胞中攝取量顯著高于陰性對照（6.9882±0.6158 vs2.4471±0.4124 pmol·mg-

9、1蛋白，p<0.05），表明成功表達(dá)轉(zhuǎn)運活性。1.25μg·mL-1綠茶提取物能夠減少OATPB1-HEK293T細(xì)胞對瑞舒伐他汀的攝取量（6.9882±0.6158 vs2.4471±0.4124 pmol·mg-1蛋白，p<0.05），而對應(yīng)于茶葉提取物中含量的EG、EGC和ECG對其攝取無統(tǒng)計學(xué)差異，EGCG減少了瑞舒伐他汀的攝取量（6.9882±0.6158 vs3.1875±0.9679 pmol·mg-1蛋白，p<0.05）

10、。④EGCG對大鼠體內(nèi)瑞舒伐他汀的藥代動力學(xué)的影響：EGCG與瑞舒伐他汀合用導(dǎo)致瑞舒伐他汀的AUC0-∞增加了64.24%±47.44%（77.99±22.52 vs47.48±11.71 h·μg·L-1，p<0.05）和Cmax增加了41.95%±83.38%（19.40±11.39vs13.66±7.01 ng·mL-1，p>0.05）。
　　結(jié)論：綠茶可提高瑞舒伐他汀體內(nèi)的暴露量；可能的機制為增加小腸上吸收，以及抑制肝臟轉(zhuǎn)