IFG-1與bFGF聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肌腱細(xì)胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 聯(lián)合應(yīng)用堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）與胰島素樣生長因子IGF-1作為誘導(dǎo)劑探討向肌腱細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)技術(shù)，以探索一種新的肌腱組織工程種子細(xì)胞的獲取方法。
　　 方法:
　　 1.分離、培養(yǎng)大鼠BMSCs并進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定:密度梯度離心法體外分離BMSCs，并對培養(yǎng)的BMSCs進(jìn)行干細(xì)胞表型鑒定與成骨、成脂肪及成軟骨多向誘導(dǎo)確定所

2、獲取的BMSCs是具有多向分化能力的BMSCs。
　　 2.觀察bFGF和IGF-1聯(lián)合應(yīng)用對BMSCs向肌腱細(xì)胞分化的作用:將BMSCs隨機(jī)分為4組，即實驗組A(IGF-1+bFGF)、實驗組B(IGF-1)、實驗組C(bFGF)及空白對照組D于37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化;RT-PCR方法檢測各組細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原以及scleraxis mRNA在3天、7天、14天和21天時的表達(dá)水平;

3、免疫熒光染色檢測各組細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原14天的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.分離培養(yǎng)的BMSCs在形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為長梭形、呈漩渦狀生長。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示細(xì)胞表面CD29和CD90表達(dá)陽性，分別為99.24％、99.06％; CD45表達(dá)陰性，為98.71％。BMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后茜素紅、油紅O、甲苯胺藍(lán)及Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均為陽性。
　　 2.誘導(dǎo)后的BMSCs A組、B組、C組、與空白對照組相

4、比其Ⅰ、Ⅲ、SCX在基因及蛋白水平上具有顯著差異，從3天開始不斷遞增，14天后轉(zhuǎn)而下降，以7天至14天的變化最明顯與空白對照組差異最大。而在A、B、C三組中，以B組Ⅰ、Ⅲ、SCX基因的表達(dá)最明顯，免疫熒光染色檢測中B組細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的表達(dá)水平最高。
　　 結(jié)論:
　　 大鼠BMSCs體外誘導(dǎo)各組所獲得的細(xì)胞與陰性對照組細(xì)胞在形態(tài)與功能上存在顯著差別，其形態(tài)特征及胞內(nèi)基質(zhì)表達(dá)近似肌腱細(xì)胞;尤其是IGF-1組。bF