生長(zhǎng)因子聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的本實(shí)驗(yàn)旨在建立體外分離、擴(kuò)增培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的方法，描述其生物學(xué)特征。探索在體外單層培養(yǎng)條件下，生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF—β1)、胰島素樣因子(IGF—I)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP一2)誘導(dǎo)MSCs向軟骨細(xì)胞分化的最佳組合。 方法用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法，分離純化大鼠MSCs。取第4代MSCs進(jìn)行成骨、成脂肪誘導(dǎo)分化，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化情況，成骨誘導(dǎo)組在誘導(dǎo)第14d進(jìn)行茜素紅染色：成脂肪誘導(dǎo)組在

2、誘導(dǎo)第14d進(jìn)行油紅染色：取第4～6代細(xì)胞，在體外單層培養(yǎng)條件下，應(yīng)用TGF-βl、IGF-I、BMP-2的組合，作為誘導(dǎo)分化因子進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，在誘導(dǎo)第21d用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)II型前膠原mRNA水平，阿新藍(lán)染色檢測(cè)蛋白聚糖合成情況。 結(jié)果從骨髓分離獲得的MSCs為體積小、核漿比大、梭形細(xì)胞，呈旋渦狀生長(zhǎng)。MSCs在相應(yīng)的誘導(dǎo)條件下，分化成骨、脂肪、軟骨細(xì)胞。半定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞II型前膠原m

3、RNA水平顯示：TGF-β1組II型前膠原mRNA表達(dá)水平明顯高于IGF-I+BMP-2組(O．48vsO．15，P

4、 結(jié)論密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法可分離出較純的MSCs，經(jīng)擴(kuò)增培養(yǎng)后獲取足夠數(shù)量的MSCs，能滿足組織工程的需要。MSCs具有多向分化的潛能，可在體外誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，具有廣闊的應(yīng)用前景TGF-pl具有單獨(dú)誘導(dǎo)MSCs向軟骨分化的能力；IGF-I與BMP-2合用時(shí)有較弱的誘導(dǎo)MSCs分化成軟骨能力；IGF-I或BMP-2與TGF-p1合用，在誘導(dǎo)MSCs向軟骨分化時(shí)有協(xié)同作用；而當(dāng)TGF-β1、IGF-I、BMP-