ICOSL介導(dǎo)的反向信號(hào)在調(diào)控GC成熟過程中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：生發(fā)中心（Germinal center,GC）輔助T細(xì)胞（Tfh或GC T）支持GCB細(xì)胞活化、存活以及功能成熟的分子機(jī)制還不是很清楚。迄今為止，GC B細(xì)胞上CD40接受Tfh細(xì)胞上CD40L的輔助信號(hào)是被研究最多的Tfh細(xì)胞提供的輔助信號(hào)。而GC B細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的許多現(xiàn)象又無法完全通過CD40的活化來解釋。GC內(nèi)T-B相互作用有眾多的共刺激分子信號(hào)通路的參與，這些信號(hào)通路在GC內(nèi)對(duì)B細(xì)胞的輔助作用還需要進(jìn)一步的研究。我們想通過

2、我們的研究，找出 GC內(nèi)對(duì)B細(xì)胞存活及功能成熟的新的分子機(jī)制，使我們對(duì)GC內(nèi)的分子信號(hào)通路有更深入的了解。
　　方法：分選GC B細(xì)胞以及GC T細(xì)胞，然后體外共培養(yǎng)，培養(yǎng)體系中加入已經(jīng)報(bào)道的共刺激分子通路的封閉性抗體，先以GC B細(xì)胞的存活為指標(biāo)，通過體外的篩選實(shí)驗(yàn)找出在GC階段，哪些信號(hào)通路對(duì)GC B細(xì)胞存活的輔助起關(guān)鍵作用。然后再通過體外刺激，及基因敲除技術(shù)找出起關(guān)鍵作用的共刺激分子通路，及這些共刺激分子通路通過激活哪些信號(hào)

3、通路來輔助 GC B細(xì)胞的存活及功能成熟。最后通過基因敲除和骨髓重建等技術(shù)來證明相關(guān)的共刺激分子通路在體內(nèi)的作用。
　　成果和結(jié)論：我們首先通過體外的篩選實(shí)驗(yàn)證明在參與 T-B互作的眾多共刺激分子通路中，ICOS-ICOSL對(duì)GC B細(xì)胞的促存活作用最為關(guān)鍵。進(jìn)一步的研究表明GCT細(xì)胞提供給GC B細(xì)胞的存活和功能成熟輔助信號(hào)是通過ICOS-ICOSL信號(hào)通路并且可通過ICOSL介導(dǎo)的反向信號(hào)來實(shí)現(xiàn)對(duì)GC B細(xì)胞存活的促進(jìn)作用。然

4、而，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)GC B上CD40介導(dǎo)的信號(hào)對(duì)GC B的存活似乎并沒有明顯的作用。用ICOS重組蛋白靜脈注射ICOS基因缺陷的小鼠能夠部分恢復(fù)GC的形成和抗體產(chǎn)生。多種ICOSL突變小鼠，包括整個(gè)B細(xì)胞ICOSL完全缺失、GC B細(xì)胞ICOSL缺失及B細(xì)胞ICOSL胞內(nèi)段缺失小鼠，都表現(xiàn)出體液免疫缺陷及GC形成受損。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)GC B細(xì)胞上ICOSL介導(dǎo)的反向信號(hào)通過激活經(jīng)典的NF-κB信號(hào)通路來上調(diào)跟 GC B細(xì)胞存活和功能成熟