抗HBV脂質(zhì)前藥自組裝體的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）是全球范圍內(nèi)慢性肝炎肝硬化和肝癌的首要成因。核苷類藥物通過抑制病毒DNA 聚合酶的作用,終止DNA 鏈的延長(zhǎng)和合成,從而達(dá)到抑制病毒復(fù)制的作用。乙型肝炎等疾病之所以缺乏有效的治療藥物,除治療藥物本身的藥理作用尚不夠理想外，其主要原因是肝靶向性差。前體藥物可提高藥物肝靶向性、增強(qiáng)治療效果、降低毒副作用。HepDirect 前藥是一類新的磷酸酯和膦酸酯前藥，可以特異性地被肝細(xì)胞CYP450 同工酶CYP3A4 酶氧化,

2、釋放活性形式的核苷酸或核苷膦酸。該類藥物具有明顯的肝靶向性且未發(fā)現(xiàn)與副產(chǎn)物相關(guān)的毒性。若將其與新型的藥物傳遞系統(tǒng)聯(lián)系起來會(huì)有更好的效果。
　　 自組裝藥物傳遞系統(tǒng)(self-assembled drug deliverysystems，SADDS)是指具有一定表面活性的兩親性藥物或前藥在水溶液中自組裝形成膠束、囊泡或立方相等高度分散的聚集體。SADDS相對(duì)于其它微粒分散體系在體內(nèi)更穩(wěn)定。藥物經(jīng)脂質(zhì)衍生化后如滿足一定分子構(gòu)型特點(diǎn)，

3、就可在水中自組裝成SADDS。這類SADDS既有脂質(zhì)前藥的性質(zhì)，如生物膜滲透性增強(qiáng)，又由于高度分散性在體內(nèi)有巨噬細(xì)胞靶向性等特點(diǎn)。
　　 本文的設(shè)計(jì)思想是將磷酸酯前藥與自組裝藥物傳遞系統(tǒng)相結(jié)合，再賦予其肝靶向長(zhǎng)循環(huán)作用，可以集合他們的優(yōu)勢(shì)，更好的發(fā)揮藥物抗病毒作用，同時(shí)又能極大的降低藥物毒副作用。
　　 本文以嘌呤類核苷類似物阿德福韋（PMEA）為模型藥物，經(jīng)過酯化環(huán)合后得到磷酸酯前藥(APE)，再經(jīng)過親酯衍生化后得到抗

4、HBV兩親性脂質(zhì)前藥：月桂酰阿德福韋磷酸酯前藥（LAPE），加入具有肝靶向長(zhǎng)循環(huán)作用的半乳糖苷制備成自組裝體，并考察其體內(nèi)外行為的一般規(guī)律。具體研究?jī)?nèi)容包括：
　　 1.抗HBV 脂質(zhì)前藥的合成及性質(zhì)設(shè)計(jì)并合成了抗HBV 脂質(zhì)前藥：正辛酰阿德福韋磷酸酯前藥，正癸酰阿德福韋磷酸酯前藥，十二酰阿德福韋磷酸酯前藥，十四酰阿德福韋磷酸酯前藥，十六酰阿德福韋磷酸酯前藥，十八酰阿德福韋磷酸酯前藥，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。考察了前藥的Langmu

5、ir單分子膜的性質(zhì)。磷酸酯前藥用脂肪長(zhǎng)鏈衍生化后親脂性大大增強(qiáng)，氫鍵和疏水相互作用是決定LAPE 溶解性和能否形成自組裝體的關(guān)鍵因素；前藥LAPE分子的成膜性較好，具有形成自組裝體的兩親性。
　　 2.半乳糖苷的合成及性質(zhì)設(shè)計(jì)并合成了長(zhǎng)循環(huán)肝靶向材料：二十聚乙二醇十六烷基醚半乳糖苷G20DE，并經(jīng)行了結(jié)構(gòu)鑒定。PEG 鏈?zhǔn)蛊渚哂虚L(zhǎng)循環(huán)作用，半乳糖能夠發(fā)揮肝靶向的作用。將其與抗HBV 脂質(zhì)前藥混合制備自組裝體，能夠得到形態(tài)較好、相

6、對(duì)穩(wěn)定的制劑，使其發(fā)揮長(zhǎng)循環(huán)肝靶向的作用。
　　 3.抗HBV 脂質(zhì)前藥自組裝體的制備及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)用甲醇（MeOH）將前藥與G20DE 溶解，采用注入法制備得到了高度分散、均勻穩(wěn)定的LAPE 自組裝體。透射電子顯微鏡和激光粒度分析儀觀察其形態(tài)、粒徑和Zeta 電位，結(jié)果表明自組裝體為類球形囊泡，平均粒徑為68nm，Zeta 電位-20.4mV。分析LAPE 自組裝體形成的機(jī)理為：LAPE分子在十二碳鏈基團(tuán)的疏水相互作用和核苷基團(tuán)的

7、氫鍵作用下自發(fā)排列成雙分子層結(jié)構(gòu)，在機(jī)械力的作用下彎曲形成類球形囊泡。G20DE的脂肪鏈部分插入到囊泡結(jié)構(gòu)中形成新的自組裝體。
　　 4.抗HBV 脂質(zhì)前藥自組裝體的物理穩(wěn)定性考察高溫、高壓、離心沉降、室溫長(zhǎng)期放置等對(duì)LAPE 自組裝體穩(wěn)定性的影響。結(jié)果顯示高溫、高壓對(duì)自組裝體的粒徑幾乎無影響，前藥含量幾乎不變；高速離心（≤10000rpm）后自組裝體粒徑無變化，粒子不易聚集，重分散性好。LAPE 自組裝體室溫放置能長(zhǎng)期保持穩(wěn)定

8、。
　　 5.抗HBV 脂質(zhì)前藥自組裝體的化學(xué)穩(wěn)定性以HPLC為含量測(cè)定方法，考察了LAPE 自組裝體在不同pH緩沖液、不同動(dòng)物血漿及小鼠組織勻漿中的降解情況。結(jié)果表明：LAPE 在pH2.0 緩沖液中很快降解，t1/2為24.8h；pH5.5 環(huán)境下相對(duì)穩(wěn)定，t1/2 為277h；在pH7.4 環(huán)境中能長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定，t1/2>630h。而LAPE 自組裝體在不同種屬動(dòng)物血漿中的降解速率有所差別，其中在小鼠和大鼠血漿中降解較快

9、，在人和犬血漿中降解緩慢。LAPE 自組裝體在小鼠肝組織勻漿中降解最快，t1/2小于1h。在小鼠脾組織勻漿中降解較快，而在腎中降解最慢。
　　 6.抗HBV 脂質(zhì)前藥自組裝體的初步藥效學(xué)通過對(duì)HBV 轉(zhuǎn)染小鼠灌胃給藥來考察LAPE 自組裝體的抗病毒效果。結(jié)果表明LAPE 自組裝體具有較好的抗HBV 作用，LAPE能夠在體內(nèi)降解為原藥阿德福韋磷酸酯前藥抑制病毒的復(fù)制，發(fā)揮藥理作用。7.自組裝體在動(dòng)物體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)和組織分布LAP

10、E 自組裝體經(jīng)小鼠靜脈注射后迅速?gòu)难合蚋髦饕M織（心，肝，脾，肺，腎）
　　 分布，在肝組織的分布是腎的三到五倍,具有明顯肝靶向性。靜脈注射后在小鼠血漿的分布相t1/2 為1.87min；消除相t1/2 為136.8min，說明LAPE 自組裝體具有一定的長(zhǎng)循環(huán)作用。長(zhǎng)循環(huán)肝靶向作用使LAPE 自組裝體能更好的發(fā)揮藥理作用并減小毒副作用。
　　 本文設(shè)計(jì)、篩選并制備得到了高度分散、均勻、穩(wěn)定的LAPE 自組裝體，證明了