果蠅嗅覺受體蛋白的無細(xì)胞體系表達(dá)研究.pdf

1、膜蛋白是一類龐大的蛋白質(zhì)家族，在生物體的生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用。膜蛋白不僅具有強(qiáng)烈的疏水性，而且需要定位到細(xì)胞膜上，導(dǎo)致其表達(dá)困難。迄今為止，由于很難獲得正確的膜蛋白，導(dǎo)致沒有任何膜蛋白獲得結(jié)構(gòu)解析。無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)是一種能夠在體外表達(dá)蛋白質(zhì)的系統(tǒng)，其特點(diǎn)為表達(dá)體系具有開放性、不受活體細(xì)胞生命限制、高效和快速。針對(duì)膜蛋白的特殊性和表達(dá)需求，我們嘗試用無細(xì)胞的方法進(jìn)行膜蛋白的表達(dá)。
　　本論文對(duì)無細(xì)胞表達(dá)體系的構(gòu)成及溫度、表達(dá)

2、時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了研究，成功建立了適合于膜蛋白表達(dá)的無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成平臺(tái)。利用建立的表達(dá)平臺(tái)，成功表達(dá)出果蠅嗅覺受體蛋白質(zhì)Or83b、Or7a和Or42a，最高表達(dá)量達(dá)到313μg/ml，實(shí)現(xiàn)了嗅覺受體蛋白的高濃度大量表達(dá)，為膜蛋白的后續(xù)研究提供堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。最后還探索了七種去污劑Brij35、Brij58、Triton100、Triton114、NP40、Tween20、Tween80對(duì)表達(dá)的影響，找到了對(duì)各蛋白可溶性表達(dá)最有效的去污劑