人羧肽酶A突變基因的構建、表達及突變羧肽酶A-抗精漿蛋白抗體融合基因的構建.pdf

1、高選擇性腫瘤化療是目前研究的重要課題之一,大多化療藥物缺乏對腫瘤組織的高選擇性,往往在對腫瘤組織發(fā)揮作用的同時也對身體正常組織產(chǎn)生毒副作用.為了解決這些問題,人們希望通過單克隆抗體直接將毒性藥物特異地帶到腫瘤組織部位,單克隆抗體與毒性藥物連接成"抗體-藥物"偶聯(lián)物,單克隆抗體特異地與腫瘤組織內(nèi)的抗原結合,從而將藥物帶到腫瘤組織部位,發(fā)揮殺死腫瘤細胞的作用.但經(jīng)過實踐發(fā)現(xiàn),"抗體-毒性藥物"偶聯(lián)物并不能非常有效地到達腫瘤部位發(fā)揮作用,這是

2、因為:(1)一定量的抗休所攜帶的藥物數(shù)量畢竟有限,(2)每一種腫瘤組織中含有的抗原數(shù)量多少不一,有些腫瘤組織中所含有的能與抗體有效結合的抗原數(shù)量非常有限,(3)抗體與毒性藥物形成大的"抗體-藥物"交聯(lián)物,難以有效地達到實質(zhì)性腫瘤部位,(4)"抗體-藥物"交聯(lián)物分子較大,易引起免疫反應,影響其在病人中的應用.我們首先以A,D引物PCR出大約1126bp的產(chǎn)物,應用瓊脂糖凝膠電泳鑒定,純化,回收;以B,C引物PCR出大約125bp的產(chǎn)物,鑒

3、定,純化,回收,再應用這兩個產(chǎn)物做重疊延伸,得到了大約1250bp的產(chǎn)物,符合我們的要求,應用DNA測序儀進行測序,結果在1126位的核苷酸由G變?yōu)锳,其余序列未變.此酶突變體可以將MTX-α-環(huán)丁基苯丙氨酸水解為有毒性的甲氨喋吟,而內(nèi)源性的羧肽酶不能將此底物催化,這樣就可能避免了應用內(nèi)源性酶特異性差,可能在腫瘤組織以外的正常組織中活化前藥分子,產(chǎn)生毒副作用的缺點,另一方面因為此突變酶和內(nèi)源性酶有較大的同源住,故免疫原牲較低,不會引起全