人抗HBsAg單鏈抗體基因的構建、表達及其表達產物的活性鑒定.pdf

1、目的 構建人抗HBsAg單鏈抗體基因,在真核細胞和原核細胞中進行表達,并對其表達產物的活性進行鑒定.方法 以從噬菌體抗體庫中篩選獲得的抗HBsAg的Fab抗體基因為模板,分別擴增出其輕、重鏈可變區(qū)(V<,L>、V<,H>)基因,通過重組PCR方法將輕、重鏈可變區(qū)基因用連接肽(Gly<,4>Ser)<,3>的編碼序列連接,并引入前導肽編碼序列,構建具有L-V<,H>-Linker-V<,L>結構的單鏈抗體基因.將所構建的單鏈抗體基因克隆入

2、綠色熒光蛋白融合表達載體pEGFP-N3,瞬時轉染COS-7細胞,分析其表達情況,穩(wěn)定轉染Jurkat細胞,建立穩(wěn)定表達ScFv融合蛋白的細胞系,并分析其表達產物的活性.將獲得的不含前導肽的單鏈抗體基因克隆入HA和6His融合的原核表達載體pTAT-HA,在大腸桿菌BL21中進行表達,分析其表達情況.表達產物并經Ni-NTA柱純化后,分析其活性.結論 (1)成功地構建了五種人抗HBsAg單鏈抗體基因.(2)瞬時轉染COS7細胞,獲得了分