TPRN基因突變檢測(cè)分析及其質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、耳聾是造成人類殘疾最常見(jiàn)的原因，我國(guó)現(xiàn)有聽(tīng)力言語(yǔ)殘疾者達(dá)2780萬(wàn)人，居各類殘疾的首位。目前全世界每1000個(gè)新生兒中就有一個(gè)先天性的聾兒，我國(guó)每年約有3萬(wàn)聾兒出生，其中60％為遺傳性聾。在遺傳性聾中，非綜合征性聾約占70％，綜合征性聾占30％。最常見(jiàn)的類型為常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾，占非綜合征性聾的比例約77％。目前已發(fā)現(xiàn)常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾位點(diǎn)73個(gè)，相關(guān)基因40個(gè)。
　　TPRN基因是2010年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)主要

2、表達(dá)在毛細(xì)胞靜纖毛Taper區(qū)域的常染色體隱性遺傳性耳聾79型(DFNB79)的致病基因，其表達(dá)產(chǎn)物為Taperin蛋白。
　　為了解TPRN基因突變?cè)谥袊?guó)人非綜合征性聾人群中的分布情況和研究Taperin蛋白在聽(tīng)覺(jué)產(chǎn)生中的作用。本實(shí)驗(yàn)一方面采用耳聾基因芯片檢測(cè)法和DNA直接測(cè)序法對(duì)耳聾患者進(jìn)行TPRN基因突變的檢測(cè)分析;另一方面構(gòu)建TPRN shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體為下一步的TPRN基因體外抑制實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
　　一.TPRN

3、基因在中國(guó)非綜合征型耳聾患者中的檢測(cè)
　　目的:研究TPRN基因在中國(guó)人非綜合征性聾患者中的突變發(fā)生的概率、突變形式。
　　方法:采用耳聾基因芯片對(duì)81名非綜合征性聾患者進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，排除了常見(jiàn)的4個(gè)致病基因的9個(gè)位點(diǎn)后，采用DNA直接測(cè)序法對(duì)這81例耳聾患者和52例健康對(duì)照成員進(jìn)行TPRN基因的檢測(cè)。
　　結(jié)果:81名耳聾患者中未發(fā)現(xiàn)已報(bào)道的TPRN基因突變;2名患者在1號(hào)外顯子處發(fā)現(xiàn)攜帶有相同的TPRN基因雜合

4、子突變559G＞T，導(dǎo)致編碼的氨基酸由丙氨酸變?yōu)榻z氨酸(A187S)，對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)相同突變。另外在患者和正常人中發(fā)現(xiàn)1號(hào)外顯子處2個(gè)同義突變157C＞T和318C＞T。經(jīng)氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守區(qū)域內(nèi)，而且在對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)該突變，此突變可能與耳聾有關(guān)。
　　結(jié)論目前發(fā)現(xiàn)TPRN基因突變?cè)谥袊?guó)人非綜合征型耳聾患者中整體發(fā)生頻率較低，其功能有待進(jìn)一步研究。
　　二.TPRN siRNA質(zhì)粒表