口腔鱗癌組織中PTEN蛋白表達及基因突變的檢測.pdf

1、目的：口腔鱗癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害人類健康，但其發(fā)生、發(fā)展的機制尚不清楚。同其它腫瘤一樣，口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多階段、多步驟漸進演化的過程，已有的研究表明許多癌基因的激活及抑癌基因的失活參與了這一過程。PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10)基因是1997年發(fā)現(xiàn)的一種

2、新的腫瘤抑制基因，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，可以通過多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞的生長，浸潤和轉(zhuǎn)移，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。本實驗主要通過對口腔鱗癌組織中抑癌基因PTEN蛋白表達和基因點突變的檢測，探討口腔鱗癌組織中PTEN蛋白的表達及PTEN基因外顯子5、8突變的情況，及其與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，并進一步分析蛋白表達與基因突變之間的關(guān)系，擬為口腔鱗癌的預(yù)防及判斷患者預(yù)后提供重要的參考指標(biāo)。

3、方法：收集口腔鱗癌及相關(guān)組織手術(shù)切除標(biāo)本和相應(yīng)的臨床病理資料，分為四組：正常口腔粘膜上皮10例；口腔上皮單純性增生10例；口腔粘膜白斑15例；口腔鱗癌72例(其中高分化組30例，中分化組26例，低分化組16例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組37例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組35例)。通過構(gòu)建組織芯片(tissue chips)結(jié)合免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶染色法(Streptavidin Proxidose immunohistochemistry m

4、ethod，SP法)檢測PTEN蛋白的表達；再把收集的標(biāo)本和臨床資料分為三組：正?？谇徽衬ど掀?0例；口腔粘膜白斑15例；口腔鱗癌32例(其中PTEN 蛋白表達陰性：20例；陽性：12例)。進行聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP)分析，檢測PTEN第5和第8外顯子的點突變情況。結(jié)果用SPSS 1

5、1.5 for，windows統(tǒng)計軟件包進行分析，PTEN蛋白陽性表達率的比較采用X2檢驗，以P<0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： (1)組織芯片蠟塊蠟質(zhì)細(xì)膩均勻，無開裂現(xiàn)象，可見107點整齊排列。切片經(jīng)染色后無脫片和扭曲，符合觀察的需要。 (2)PTEN蛋白陽性表達部位在細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、黃褐色顆粒，PTEN蛋白在正?？谇徽衬?、口腔上皮單純性增生組織中的陽性表達率均為100％；在口腔粘膜白斑組織中

6、的陽性表達率為93.3％；在口腔鱗癌組織中的陽性表達率為72.22％，其中高、中、低分化的口腔鱗癌組織中的陽性表達率分別為90.00％，76.92％，31.25％；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達率為59.46％，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達率為85.71％。很明顯，正?？谇徽衬ぁ谇徽衬ぐ┣安∽儭谇击[癌，PTEN蛋白的表達呈逐漸下降趨勢，隨著分化程度降低，表達率逐漸下降；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達率進一步下降。正?？谇徽衬そM、上皮單純

7、增生組和口腔粘膜白斑組合并，與口腔鱗癌組之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=9.272，P=0.002<0.05)；口腔粘膜白斑組與口腔鱗癌組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(X2=1.978，P-0.160>0.05)；口腔鱗癌高分化組與中分化組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(X2=0.929，P=0.335>0.05)；口腔鱗癌高分化組與低分化組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=14.350，P=0.000<0.05)；口腔鱗癌中分化組與低分化組比較，差異

8、有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=8.576，P=0.000<0.05)；PTEN蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間的表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=6.180，P=0.013<0.05)；但PTEN蛋白在口腔鱗癌組織中的表達與患者的性別、年齡、腫塊的大小、浸潤深度、pTNM分期等臨床病理參數(shù)之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 (3)10例正?？谇徽衬?，15例口腔粘膜白斑，32例口腔鱗癌組織標(biāo)本PTEN基因第5、8外顯子全長序列

9、PCR擴增均獲成功；第5、8外顯子均未發(fā)現(xiàn)有突變。 結(jié)論： (1)組織芯片具有高通量、高效率、節(jié)省試劑和時間等優(yōu)點，并且使各組織的實驗條件相同，減少了實驗誤差，在大樣本研究中具有明顯的優(yōu)勢。 (2)正?？谇徽衬ぁ谇徽衬ぐ┣安∽儭谇击[癌，PTEN蛋白的表達呈逐漸降低趨勢，提示PTEN蛋白可能在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，其表達下降可能是口腔鱗癌組織細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的原因之一。 (3)PTEN蛋白的表達

10、雖與患者的性別、年齡、腫塊的大小、浸潤深度、pTNM分期等臨床病理參數(shù)之間無相關(guān)性，但與口腔鱗癌的組織分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示檢測PTEN蛋白表達情況可能為預(yù)測口腔鱗癌的惡性程度和判斷患者的預(yù)后提供新的參考指標(biāo)。(4)口腔鱗癌組織中PTEN基因第5、8外顯子均未發(fā)現(xiàn)有突變，提示口腔鱗癌的發(fā)生可能和PTEN基因第5、8外顯子的突變無關(guān)。(5)口腔鱗癌組織中PTEN蛋白表達下降或不表達，很可能和PTEN基因第5、8外顯子的突變無關(guān)