毒素探針調(diào)節(jié)前列腺癌Mat-LyLu細胞轉(zhuǎn)移的差異質(zhì)膜蛋白質(zhì)及磷酸化蛋白質(zhì)分析.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的首要因素，統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，九成以上的腫瘤患者死于腫瘤轉(zhuǎn)移而不是原發(fā)性腫瘤。腫瘤轉(zhuǎn)移的程度與電壓門控鈉離子通道的表達有關(guān)，腫瘤細胞的遷移和轉(zhuǎn)移受鈉通道（尤其是Nav1.7亞型）激活或者抑制的影響。
　　研究表明Nav1.7在高轉(zhuǎn)移性前列腺癌Mat-LyLu細胞上特異性高表達，并促進其轉(zhuǎn)移活性，但分子機制尚不清楚。磷酸化修飾和互作蛋白是鈉通道功能執(zhí)行和調(diào)控的必要途徑:一方面磷酸化修飾在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮重

2、要作用，在Nav1.7活性受到影響時，其磷酸化修飾會出現(xiàn)動態(tài)變化;另一方面，Nav1.7活性的改變可以通過與不同類型的蛋白質(zhì)發(fā)生互作來行使功能。闡明在Mat-LyLu細胞轉(zhuǎn)移過程中Nav1.7互作蛋白和磷酸化修飾能夠為Nav1.7調(diào)節(jié)Mat-LyLu細胞轉(zhuǎn)移的分子機制提供理論基礎(chǔ)。
　　因此，第一部分，我們利用兩種作用于Nav1.7的多肽毒素JZTX-Ⅰ和HNTX-Ⅲ處理大鼠前列腺癌Mat-LyLu細胞，結(jié)合iTRAQ標記與TiO

3、2富集，通過LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定比較JZTX-Ⅰ處理組（轉(zhuǎn)移增強組）、Control組（對照組）和HNTX-Ⅲ處理組（轉(zhuǎn)移減弱組）中的差異磷酸化蛋白質(zhì)。我們一共鑒定到1919條非冗余磷酸化肽段，包含3519個磷酸化位點，在657個非冗余磷酸化蛋白質(zhì)上。在至少兩個iTRAQ平行組中都鑒定到的磷酸化蛋白質(zhì)有446個（對應(yīng)1106條磷酸化肽段，將這一組記為iTRAQ-O)，這些蛋白主要參與細胞生理進程和代謝，行使各種分子結(jié)合以及轉(zhuǎn)錄共激活

4、活性功能。通過在線motif-X軟件對iTRAQ-O組1106條磷酸化肽段進行了基于序列的motif富集分析，一共發(fā)現(xiàn)13種絲氨酸motif序列、4種蘇氨酸motif序列及1種酪氨酸motif序列。我們收集了iTRAQ-O組中446個overlap磷酸化蛋白質(zhì)的定量信息，得到每個磷酸化蛋白質(zhì)114/116和115/116這兩項比值，通過將比值≤0.67及比值≥1.5作為閾值共得到120個差異磷酸化蛋白質(zhì)，將這些蛋白分成七組進行了相關(guān)生物

5、信息學分析，并從中找出與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異磷酸化蛋白質(zhì)，通過STRING軟件分析了其蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。
　　第二部分，我們利用Nav1.7的激活劑藜蘆堿處理Mat-LyLu細胞，提取質(zhì)膜，結(jié)合雙向電泳和質(zhì)譜鑒定，一共獲得29個差異表達蛋白質(zhì)點，其中，與對照組相比，藜蘆堿處理組中表達下調(diào)的蛋白有28個，表達上調(diào)的蛋白有1個。在29個差異表達蛋白質(zhì)點中，我們通過功能注釋分析，得到了與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的4個蛋白質(zhì):Tonsoku-li