基于高效能LC--MS-MS分析的新型抗艾滋病復方藥物的臨床前藥代動力學研究.pdf

1、新型抗艾滋病復方藥物（富馬酸替諾福韋酯200mg+拉米夫定300mg+依非韋倫400mg，q.d.）是由加利福尼亞大學洛杉磯分校(UCLA)何志明院士課題組采用反饋系統(tǒng)控制(FSC)技術按照不同藥物組合和劑量進行測試篩選優(yōu)化得到的低毒高效的抗艾滋病復方藥物。本課題建立高靈敏度、高特異性的LC-MS/MS方法對新型抗艾滋病復方藥物進行了臨床前藥代動力學研究，了解其在動物體內吸收、分布、代謝及排泄等藥動學及其相互作用過程，為新藥的申報和進一

2、步臨床試驗研究提供試驗資料和參考依據。
　　一、生物樣品中替諾福韋、拉米夫定及依非韋倫定量分析方法的建立與確證
　　本文建立了快速、靈敏、可靠的LC-MS/MS方法測定不同生物樣品中替諾福韋(TEF)、拉米夫定(3TC)及依非韋倫(EFV)的濃度。選用阿昔洛韋(ACV)、雙氫氯噻嗪(HCT)及恩曲他濱(FTC)作內標，樣品采用蛋白沉淀法處理，色譜柱選用AgilentZORBAX SB-Aq(4.6×150mm，5μm)和Ul

3、timate XB-C18(4.6×50mm，5μm);流動相為甲醇-水（25mM醋酸銨+0.1％甲酸）和乙腈-水（0.1％甲酸）;梯度洗脫，流速為1mL/min，3∶7分流。采用ESI離子源，MRM檢測模式，正離子掃描模式下，用于定量的離子通道分別為m/z288.3→176.4(TEF)、m/z230.3→111.9(3TC)、m/z316.0→244.0(EFV)、m/z226.1→152.2(ACV,IS)、m/z247.8→12

4、9.9/101.1(FTC,IS);負離子掃描模式下，用于定量的離子通道分別為m/z314.0→243.9(EFV)、m/z296.0→204.8(HCT，IS);不同生物樣品中TEF、3TC及EFV定量分析方法學驗證結果均符合FDA、CFDA等頒布的生物樣品定量分析相關指導原則且成功應用于新型抗艾滋復方藥物的臨床前藥代動力學研究。
　　二、新型抗艾滋病復方藥物在Beagle犬體內藥代動力學相互作用研究
　　采用自身對照、隨

5、機交叉試驗方法對新型抗艾滋病復方藥物在Beagle犬體內的藥代動力學相互作用進行評價。通過比較Beagle犬單劑量口服給藥抗艾滋病單一組分和復方藥物后體內TEF、3TC及EFV的藥時曲線及相應藥動學參數，發(fā)現不同Beagle犬個體間差異較大，而TEF、3TC及EFV的主要藥代動力學參數均不存在顯著性差異(P＞0.05)，即不存在藥物相互作用。提示TEF、3TC與EFV不存在相互作用，是否與Beagle犬個體差異大而掩蓋了藥物相互作用相關

6、有待進一步的考察研究。
　　三、新型抗艾滋病復方藥物在Beagle犬體內藥代動力學研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復方藥物在Beagle犬體內的藥代動力學過程進行考察。對Beagle犬單劑量口服給藥低、中、高三個劑量組抗艾滋病復方藥物后體內TEF、3TC及EFV的藥動學參數Cmax、AUC0-τ與相對應的給藥劑量進行線性回歸，得TEF的相關系數為R2=0.4214(Cmax)和R2=0.6849(AUC0-τ)

7、，3TC的相關系數為R2=0.7889(Cmax)和R2=0.8286(AUC0-τ)，提示TEF和3TC的藥動學參數AUC0-τ與給藥劑量基本呈正相關，而EFV的相關系數僅為R2=0.2289(Cmax)和R2=0.3047(AUC0-τ)。Beagle犬多劑量給藥復方藥物第四天后，體內TEF、3TC及EFV的血藥濃度基本上達到穩(wěn)態(tài)。單劑量和多劑量口服給藥抗艾滋病復方藥物后TEF、3TC及EFV的平均藥時曲線AUC累積比分別為1.89

8、、0.95和1.17。以藥物生物等效性的接受標準為參比（上限界定為1.25），提示連續(xù)給藥7天后TEF在Beagle犬體內有蓄積，3TC及EFV無蓄積。
　　四、新型抗艾滋病復方藥物在SD大鼠體內藥代動力學研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復方藥物在SD大鼠體內的藥代動力學及相互作用進行考察。對SD大鼠單劑量口服給藥低、中、高三個劑量組抗艾滋病復方藥物后體內TEF、3TC及EFV的藥動學參數Cmax、AUC0-τ

9、與相應給藥劑量進行線性回歸，得TEF相關系數為R2=0.3035(Cmax)和R2=0.7803(AUC0-τ)，3TC相關系數為R2=0.6134(Cmax)和R2=0.8646(AUC0-τ)，EFV相關系數為R2=0.6886(Cmax)和R2=0.5314(AUC0-τ)，提示TEF、3TC及EFV的藥動學參數AUC0-τ與給藥劑量基本呈正相關。比較SD大鼠單劑量口服給藥抗艾滋病復方藥物各單一組分和復方藥物后體內TEF、3TC及

10、EFV的藥時曲線及相應藥動學參數，發(fā)現TEF及3TC各參數無顯著性差異(P＞0.05);EFV的藥動學參數Cmax、MRT存在顯著性差異(P＜0.05)。提示SD大鼠口服給藥抗艾滋病復方藥物后對TEF、3TC體內藥代動力學無顯著影響，對EFV在體內的吸收、消除過程有一定的影響，即可能存在藥物間相互作用。
　　五、新型抗艾滋病復方藥物在SD大鼠體內組織分布及排泄研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復方藥物在SD大鼠體

11、內主要臟器組織中的分布狀況及其排泄特征進行研究。從抗艾滋病復方藥物在各組織中的分布結果中發(fā)現，富馬酸替諾福韋酯(TDF)經胃腸道吸收后迅速代謝成TEF，在腎臟中分布最快、濃度最高，肝臟次之。TEF不易通過血腦屏障進入腦組織，在腦組織中分布較少。給藥2h后，3TC在腎組織中迅速達峰且分布濃度最高，24h仍維持較高濃度的分布。3TC在血流灌注豐富的組織（心、肝、脾、肺）中也有較為廣泛的分布且達到較高濃度水平，在腦組織中分布較少。EFV在各組

12、織中的濃度分布順序為肝＞心、脾、腎、腦＞肺。藥物EFV經胃腸道吸收，原型藥物在肝臟中分布最快、濃度最高，其易于通過血腦屏障，因此在腦組織中濃度較高。
　　從排泄實驗結果中可以看出，SD大鼠口服給藥抗艾滋病復方藥物后，TDF主要以代謝物TEF形式從尿液、糞便及膽汁中排泄，平均累積排泄率分別為12.50％、28.84％和0.285％;3TC在尿液、糞便和膽汁中的平均累積排泄率分別為21.37％、27.61％和1.293％，主要以原型形