創(chuàng)新藥物GP205的體內(nèi)分析及臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本課題主要對(duì)創(chuàng)新藥物GP205進(jìn)行臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，計(jì)算相關(guān)的臨床前藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，考察給藥劑量與相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的相關(guān)性特征，確定口服藥物GP205后體內(nèi)吸收的絕對(duì)生物利用度，檢驗(yàn)多劑量給藥后藥物的累積效應(yīng)。
　　 一、生物樣品中GP205定量分析方法的建立
　　 本研究建立了靈敏、可靠的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測(cè)定生物樣品（Beagle犬、SD大鼠血漿）中創(chuàng)新藥物GP205的濃度并且研究了GP

2、205的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為。選用紫杉醇作為內(nèi)標(biāo)，樣品前處理采用甲基叔丁基醚進(jìn)行液液萃取。色譜柱選用Agilent ZORBAX SB-C18(3mm×100mm，3.5μm);流動(dòng)相為甲醇-含0.1％甲酸的水溶液(95∶5，v/v)進(jìn)行等度洗脫，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量10μl，分析時(shí)間5min。采用ESI離子源、正離子掃描模式，掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(selected reaction monitor，SRM);用于定量的離子通

3、道分別為m/z887→787(GP205)和m/z876→307.80（內(nèi)標(biāo)，紫杉醇），碰撞能量分別為35V和21.5V。
　　 本研究，建立的Beagle犬血漿樣品分析方法的線性范圍為1.996～4990.00ng/ml，SD大鼠血漿樣品分析方法的線性范圍為1.990～4975.00ng/ml，最低定量下限為2ng/ml;批內(nèi)、批間精密度（RSD）均小于15％;生物樣品經(jīng)液液萃取前處理后的提取回收率大于80％;基質(zhì)效應(yīng)的考察結(jié)

4、果為90％～100％，可以確定生物基質(zhì)不影響藥物濃度的測(cè)定;GP205和內(nèi)標(biāo)紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液在-20℃冰箱放置40天穩(wěn)定，血漿樣品室溫下放置2小時(shí)后提取、樣品處理后自動(dòng)進(jìn)樣器放置12小時(shí)、凍融三次以及-80℃低溫冰箱放置40天后提取均穩(wěn)定，不影響生物樣品的正常測(cè)定。
　　 二、GP205在Beagle犬體內(nèi)單劑量給藥的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究
　　 試驗(yàn)采用24條健康、成年Beagle犬，分成4組，雌雄各半，分別口服給藥低劑量

5、0.75mg/kg、中劑量1.5mg/kg、高劑量3mg/kg，靜注給藥0.5mg/kg，于給藥前及給藥后不同時(shí)間點(diǎn)取血，用本研究建立的Beagle犬血漿樣品分析方法測(cè)定Beagle犬血漿中的藥物濃度。根據(jù)測(cè)得的濃度數(shù)據(jù)，建立血藥濃度-時(shí)間曲線，采用非房室模型計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及口服給藥后的絕對(duì)生物利用度。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，Beagle犬單劑量口服GP205(0.75mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

6、Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為35.19±10.60ng/ml，3.67±0.52h，6.48±0.48h，11.45±0.86h，380.37±131.22 ng·h/ml,422.09±144.13 ng·h/ml; Beagle犬單劑量口服GP205(1.5mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為

7、165.12±34.56ng/ml,3.17±0.75h,7.22±1.48h,9.84±1.51h,1061.50±331.06ng·h/ml,1172.98±359.42 ng·h/ml; Beagle犬單劑量口服GP205(3mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、tmax、 t1/2、 MRT、AUC0～τ、AUC0～∞分別為329.06±52.61ng/ml,3.17±0.75h,7.56±1.

8、77h,9.48±1.33h,1879.67±381.71 ng·h/ml,2060.24±393.14ng·h/ml; Beagle犬單劑量靜注GP205(0.5mg/kg)后，GP205在Beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)C0、t1/2MRT、Cl、Vd、AUC0～τ、AUC0～∞分別為2689.81±487.54ng/ml,12.09±3.13h,8.36±2.82h,0.40±0.05L/h/kg,3.25±0.87L/kg,1

9、120.33±121.04 ng·h/ml，1275.22±156.20 ng·h/ml。GP205在Beagle犬體內(nèi)吸收的相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與給藥劑量基本呈線性相關(guān)，說(shuō)明該藥物在Beagle犬體內(nèi)的吸收基本呈線性動(dòng)力學(xué)特征。通過(guò)對(duì)口服給藥中劑量的藥時(shí)曲線下面積與經(jīng)靜注給藥后的藥時(shí)曲線下面積相比，計(jì)算得到GP205的生物利用度為31.53％，為臨床給藥劑量控制提供重要的理論依據(jù)。
　　 三、GP205在Beagle犬體內(nèi)多劑量

10、給藥的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究
　　 本試驗(yàn)選用6條成年、健康Beagle犬多劑量口服給藥GP205中劑量(1.5mg/kg)進(jìn)行多劑量試驗(yàn)，連續(xù)給藥7天，于第5、6、7三天給藥前取血，在第7天給藥后，按照單劑量取血時(shí)間點(diǎn)安排進(jìn)行取血，以考察多劑量給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)過(guò)程、峰(Cmax)-谷(Cmin)波動(dòng)系數(shù)DF、穩(wěn)態(tài)藥代動(dòng)力學(xué)特征和多劑量給藥體內(nèi)可能產(chǎn)生的蓄積效應(yīng)。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，第五天起，Beagle犬體內(nèi)GP205的血藥濃

11、度基本上達(dá)到穩(wěn)態(tài)，即血藥濃度不再隨給藥次數(shù)而增加。通過(guò)綜合比較第七天與第一天口服給藥1.5mg/kg的GP205后體內(nèi)GP205動(dòng)態(tài)過(guò)程藥時(shí)曲線、曲線下面積AUC的顯著性差異檢驗(yàn)、第七天穩(wěn)態(tài)AUC與第一天AUC的平均累積比，提示多劑量第七天口服給藥1.5mg/kg的GP205后體內(nèi)GP205血藥濃度不產(chǎn)生明顯的蓄積效應(yīng)。
　　 四、GP205在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　 本研究依據(jù)《化學(xué)藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技

12、術(shù)指導(dǎo)原則》對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的要求，對(duì)嚙齒類動(dòng)物——SD大鼠進(jìn)行單劑量給藥試驗(yàn)，考察藥物在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 試驗(yàn)采用24只SD大鼠，分成4組，雌雄各半，分別口服給藥低劑量2.5mg/kg、中劑量5mg/kg、高劑量10mg/kg，靜注給藥1mg/kg，于給藥前及給藥后不同時(shí)間點(diǎn)取血，用本研究建立的SD大鼠血漿樣品分析方法測(cè)定SD大鼠血漿中的藥物濃度。根據(jù)測(cè)得的濃度數(shù)據(jù)，建立血藥濃度-時(shí)間曲線，采用非房室模型計(jì)算藥動(dòng)

13、學(xué)參數(shù)及口服給藥后的絕對(duì)生物利用度。
　　 結(jié)果表明，SD大鼠單劑量口服GP205(2.5mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、tmax、t1/2、 MRT、AUC0～∞分別為4260.34±400.35ng/ml、6.3±0.8h、12.38±1.51h、19.35±3.22h、70136.79±16623.73 ng·h/ml; SD大鼠單劑量口服GP205(5mg/kg)后，GP205在SD大鼠

14、體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax tmax、t1/2、MRT、AUC0～∞分別為6782.15±749.52ng/ml、6.3±1.5h、13.91±1.48h、22.17±2.18h、135312.81±13439.93 ng·h/ml; SD大鼠單劑量口服GP205(10mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Cmax、tmax、 t1/2、 MRT、AUC0～∞分別為9406.12±582.99ng/ml、6.3±0.

15、8h、17.13±2.88h、25.56±3.47h、206888.49±19318.30ng·h/ml; SD大鼠單劑量靜注GP205(1 mg/kg)后，GP205在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)C0、 t1/2、 MRT、Cl、Vd、AUC0～∞分別為9511.56±442.31ng/ml、16.26±2.99h、20.76±3.41h、0.015±0.006L/h/kg、0.31±0.12L/kg、75210.88±23751.7