基于微透析技術(shù)的創(chuàng)新藥物五肽臨床前藥代動力學(xué)研究.pdf

1、五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)是一種應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)合成的新型抗腦梗藥物。其在體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物為二肽。本研究基于五肽的在SD大鼠和Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)基礎(chǔ)上，應(yīng)用微透析結(jié)合LC-MS/MS方法，研究五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)及其主要代謝產(chǎn)物二肽(Asn-Ser)的臨床前藥代動力學(xué)，為進一步開展臨床研究提供參考。
　　 一、微透析探針的制備及其體外回收率的考察
　　 本文完成了微透

2、析探針的研制，考察了探針的體外回收率，實驗結(jié)果表明體內(nèi)回收率可采用反透析法，探針回收率與灌流液流速成反比，與溶媒中藥物濃度無關(guān)，五肽探針回收率在120min內(nèi)基本保持穩(wěn)定，本研究為微透析技術(shù)應(yīng)用于創(chuàng)新藥物五肽體內(nèi)藥代動力學(xué)研究提供了實驗依據(jù)。
　　 二、生物樣品中五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)及其主要代謝產(chǎn)物二肽(Asn-Ser)定量分析方法的建立及確證
　　 本文建立了透析液樣品中五肽(Met-Gln-

3、Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的LC-MS/MS測定方法，微透析樣品無需復(fù)雜前處理。色譜柱:Hanbon Hedera CN柱，5μm，1004.6mm，柱溫25℃;流動相組成甲醇∶水（含0.1％甲酸）=60∶40(V∶V)，等度洗脫，流速0.5mL/min，進樣時間3min，進樣量10μL。采用ESI離子源、正離子檢測，MRM模式進行質(zhì)譜分析。所有微透析樣品的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性等均達到

4、生物樣品定量分析的要求。該方法成功應(yīng)用于SD大鼠血液透析液樣品、腦部透析液樣品和Beagle犬血液透析液樣品的藥代動力學(xué)研究。
　　 三、五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)及其主要代謝產(chǎn)物二肽(Asn-Ser)在SD大鼠血液透析液和腦部透析液的藥代動力學(xué)研究
　　 本實驗研究了SD大鼠單劑量靜脈推注給藥PEP-801溶液0.5 mg/kg、1 mg/kg、2mg/kg（以五肽Met-Gln-Cys-Asn-S

5、er計）后SD大鼠血液微透析藥代動力學(xué)。采用LC-MS/MS法分別測定了3組SD大鼠給藥后不同時間段血液透析液中五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的濃度，經(jīng)探針回收率校正和非房室模型法估算得到SD大鼠體內(nèi)五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的藥動學(xué)參數(shù)。SD大鼠體內(nèi)五肽游離濃度藥時曲線的末端相消除半衰期(t1/2)、平均駐留時間(MRT)、單劑量靜脈推注給藥最大血藥濃

6、度（Cmax）、全身清除率(Clr)、表觀分布容積(VD)、 AUC0～τ、 AUC0～∞分別為1.92±0.23 min、2.27±0.35 min、2.09±0.30min,6.62±0.17min、6.84±0.18min、6.68±0.08min,176.85±9.62 ng/mL、282.45±29.07ng/mL、556.27±26.41 ng/mL,0.27±0.02L/min/kg、0.33±0.02 L/min/kg、

7、0.33±0.01 L/min/kg,1.76±0.13 L/kg、2.23±0.17 L/kg、2.21±0.06 L/kg,1831.11±132.68 ng·min/mL、3008.2±202.14 ng·min/mL、6005.73±192.46 ng·min/mL,1888.21±148.32 ng·min/mL、3080.88±191.99 ng·min/mL、6058.71±182.61 ng·min/mL。SD大鼠體內(nèi)五

8、肽代謝產(chǎn)物二肽游離濃度藥時曲線的末端相消除半衰期(t1/2)、平均駐留時間(MRT)、單劑量靜脈推注給藥最大血藥濃度(Cmax)、全身清除率(ClT)、表觀分布容積(VD)、AUC0～τ、AUC0～∞分別為4.31±0.42min、4.38±0.67 min、6.33±0.45 min，8.29±0.27 min、8.14±0.08min、8.04±0.10 min，241.44±8.74 ng/mL、349.61±18.31 ng/m

9、L、705.7±30.59 ng/mL,0.19±0.01 L/min/kg、0.22±0.01 L/min/kg、0.23±0.01 L/min/kg,1.54±0.12 L/kg、1.83±0.05 L/kg、1.85±0.08 L/kg，2613.94±149.23 ng·min/mL、4397.25±141.28ng·min/mL、8596.52±278.4 ng·min/mL,2705.15±156.71 ng·min/mL、

10、4449.54±149.96ng·min/mL、8693.46±279.48 ng·min/mL。五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)及其代謝產(chǎn)物二肽在SD大鼠體內(nèi)血液微透析藥代動力學(xué)規(guī)律與給藥劑量線性相關(guān)，符合線性藥代動力學(xué)特征。
　　 本實驗研究了SD大鼠單劑量靜脈推注給藥PEP-801溶液2 mg/kg（以五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser計）后SD大鼠腦部微透析藥代動力學(xué)。采用LC-MS/MS法測定了S

11、D大鼠給藥后不同時間段腦部透析液中五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的濃度，結(jié)果表明在單劑量靜脈推注給藥PEP-801溶液2mg/kg（以五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser計）過程中（10min時間段）以及推注后2min時間段內(nèi)，腦部（透析液中）均存在著一定濃度的五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)藥效成分，但五肽腦部透析液中濃度相對于血液透析液中五肽濃度較低，同時未檢出五肽(Met

12、-Gln-Cys-Asn-Ser)代謝產(chǎn)物二肽(Asn-Ser)。經(jīng)探針回收率校正和非房室模型法估算得到SD大鼠腦部五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)的藥動學(xué)參數(shù)。SD大鼠腦部五肽游離濃度藥時曲線的單劑量靜脈推注給藥腦部最大藥物濃度（Cmax）、平均駐留時間(MRT)、全身清除率(ClT)、表觀分布容積(VD)、AUC0～τ分別為54.81±3.11 ng/mL、20.53±4.40min、1.84±0.25 L/min/k

13、g、36.96±1.69 L/kg、467.48±12.58 ng·min/mL。四、五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)及其主要代謝產(chǎn)物二肽(Asn-Ser)在Beagle犬血液透析液的藥代動力學(xué)研究
　　 本實驗研究了Beagle犬單劑量靜脈推注給藥PEP-801溶液0.2mg/kg、0.4mg/kg、0.8mg/kg（以五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser計）后Beagle犬血液微透析藥代動力學(xué)。采用LC-

14、MS/MS法分別測定了3組Beagle犬給藥后不同時間段血液透析液中五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的濃度，經(jīng)探針回收率校正和非房室模型法估算得到Beagle犬體內(nèi)五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser)和二肽(Asn-Ser)的藥動學(xué)參數(shù)。Beagle犬體內(nèi)五肽游離濃度藥時曲線的末端相消除半衰期（t1/2）、平均駐留時間(MRT)、單劑量靜脈推注給藥最大血藥濃度（Cmax）、全身清除率(Cl

15、T)、表觀分布容積(VD)、 AUC0～τ、 AUC0～∞分別為2.76±0.17 min、2.18±0.21 min、2.17±0.18 min,17.43±0.19 min、17.22±0.17 min、17.57±0.00 min,81.08±6.88 ng/mL、142.44±4.65ng/mL、252.00±7.13 ng/mL,0.09±0.01 L/min/kg、0.1±0.00 L/min/kg、0.12±0.00L/m

16、in/kg,1.54±0.11 L/ kg、1.73±0.05 L/ kg、2.17±0.07 L/ kg,2223.7±147.02ng·min/mL、3941.57±124.1 ng·min/mL、6452.32±166.76 ng·min/mL,2274.22±141.33ng·min/mL、3974.67±132.72ng·min/mL、6484.11±168.43 ng·min/mL。Beagle犬體內(nèi)五肽代謝產(chǎn)物二肽游離濃度

17、藥時曲線的末端相消除半衰期（t1/2）、平均駐留時間(MRT)、單劑量靜脈推注給藥最大血藥濃度(Cmax)、全身清除率(ClT)、表觀分布容積(VD)、AUC0～τ、 AUC0～∞分別為3.56±0.17 min、5.62±0.38 min、7.32±0.77 min,20.59±0.61min、19.97±0.2 min、20.18±0.43 min,124.78±9.82 ng/mL、179.68±15.12 ng/mL、276.8

18、5±2.76 ng/mL,0.06±0.01 L/min/kg、0.08±0.00 L/min/kg、0.1±0.00 L/min/kg,1.18±0.16 L/ kg、1.56±0.06 L/ kg、2.03±0.08 L/ kg,3444.4±333.91 ng·min/mL、5033.76±227.54 ng·min/mL、7848.42±200.36 ng·min/mL,3512.9±337.41 ng·min/mL、5117.