硫代反義寡核苷酸藥物的臨床前藥代動力學研究.pdf

1、反義寡核苷酸藥物(ASON)是近年來發(fā)展起來的一種可在基因水平特異性阻斷特定基因轉錄和表達的新型生物技術藥物，可用于病毒感染性疾病、心血管系統疾病以及癌癥等多種疾病的治療。癌泰得和流感泰得為本室篩選出的兩種具有較好抗腫瘤及抗病毒活性的硫代反義寡核苷酸化合物?，F已將二者作為創(chuàng)新藥物予以研究和開發(fā)。本課題旨在通過對這兩種化合物的質量控制分析方法及動物體內藥代動力學性質的研究，對硫代寡核苷酸質量控制中的一些關鍵技術進行研究與探討，并為人體藥代

2、動力學評價奠定基礎。研究工作主要包括以下三個方面： 1.硫代反義寡核苷酸藥物質量控制分析方法的建立 確定了毛細管凝膠電泳(CGE)對硫代寡核苷酸的最佳分析條件，考察了凝膠濃度、溫度、電場強度等因素對全長序列和截短序列分離的影響，該方法經條件優(yōu)化后可很好地實現全長序列n和相差一個核苷的序列n-1完全分離(R>1.5)。采用陰離子高效液相色譜(HPLC)對硫代不完全雜質(P=O)<,x>進行分析。經條件優(yōu)化后可使全長序列n和

3、(P=O)<,1>雜質達到基線分離，并可檢出產品中含量為1％的硫代不完全序列。<'31>P核磁共振(<'31>P-NMR)譜用于檢測微量的未完全硫代寡核苷酸，質譜(MS)測定產品的分子量，采用自行建立的測序方法，對癌泰得和流感泰得序列進行分析，結果表明該方法所測序列與理論序列完全一致。 2．癌泰得臨床前藥代動力學研究 建立了不同生物樣品中癌泰得含量的CGE測定方法?？疾炝税┨┑迷谘獫{、尿液、糞便以及膽汁中藥物濃度與面積遷

4、移時間比相對值的線性范圍：血漿中為2～800μg/ml，尿液和糞便中為1～160μg/ml(μg/g)，膽汁中為2～200μg/ml。該方法測得血漿樣品中日內精密度為2.35％～15.94％，日間精密度為1.30％～6.85％，相對回收率在97.42％±4.20％至104.45％±16.64％之間；尿樣中日內精密度為1.26％～15.13％，同間精密度為0.90％～2.94％，相對回收率在96.53％±1.66％至106.54％±12.

5、22％之間；糞樣中同內精密度為1.53％～12.97％，日間精密度為0.43％～3.75％，相對回收率在90.92％±1.39％至110.75％±7.79％之間；大鼠膽汁樣品中R內精密度為3.76％～9.04％，日間精密度為1.01％～2.54％，相對回收率在96.64％±6.51％至99.20％±6.59％之間。所建方法專屬性強、線性關系良好、濃度范圍寬，靈敏度、精密度、準確度均能滿足體內藥物分析的要求。 小鼠單次靜脈注射

6、低、中、高三個劑量(25、50和100mg/kg)癌泰得后，房室模型擬合結果表明體內藥動學過程符合靜脈注射的二室模型；統計距法計算得到平均滯留時間MRT<,(0-t)>分別為7.99、17.073和17.52min，血漿末端清除半衰期t<,1/2>分別為9.678、27.014和33.553min；梯形法計算得到的藥時曲線下面積ALlC(o_11分別為1017.28、2570.68和4366.79mg/L·min。結果表明，癌泰得在體內

7、呈現線性動力學的特性，并在體內迅速分布和消除。 通過研究癌泰得在動物體內的排泄規(guī)律可以了解到，該藥是以全長序列和一系列縮短的寡核苷酸的形式從小鼠體內排泄掉。靜脈給藥48h內，癌泰得在小鼠尿液和糞便中總累積排泄量為7.65％，其中大部分通過尿液排泄(6.26％)，其次為糞便排泄(1.39％)，膽汁中排泄量極低。在不同時間段內，小鼠排泄的全長序列隨時間的增加而減少，但藥物與代謝物的構成基本相同，而且在尿液和糞便中的構成也基本相同。

8、 采用超濾法分別測定了癌泰得與人、比格犬、Wistar大鼠血漿以及人血漿白蛋白(HSA)的蛋白結合率，結果表明癌泰得與各種屬來源的血漿蛋白結合率均較高(>99％)，并存在種屬差異。癌泰得與HAS的結合率>93％，說明在人血漿中主要與白蛋白結合，并且隨著藥物濃度的增加，與白蛋白的結合出現飽和現象。 3．流感泰得的藥代動力學研究與生物利用度測定 分別對靜脈注射和滴鼻兩種給藥途徑小鼠體內的藥代動力學性質進行了研究。結果表

9、明，小鼠單次靜脈注射40mg/kg流感泰得后體內藥動學過程符合三室模型，單次鼻腔給藥則符合非靜脈給藥的一室模型。靜脈給藥和鼻腔給藥后C<,max>分別為425.89和11.16mg/L，MRT<,(0-t)>分別為17.327和94.04min，說明滴鼻給藥與靜脈給藥藥物在體內的維持時間更長。小鼠鼻腔給藥的絕對生物利用度為51.48％。本研究還對兩種給藥途徑肺組織中藥物濃度進行了比較。結果顯示，滴鼻給藥時肺組織中流感泰得濃度遠遠高于靜脈